斑马鱼胃肠道粘膜屏障系统由较完整的机械屏障、化学屏障和免疫屏障构成,与哺乳动物高度相似,可作为胃肠道粘膜屏障研究的动物模型。三******磺酸(TNBS)可破坏肠道粘膜屏障,与肠组织蛋白结合形成抗原,发生变化反应,诱发结肠炎。杯状细胞主要分泌黏蛋白,形成黏膜屏障以保护上皮细胞,肠黏膜损伤时杯状细胞数量减少。我们可以应用特异性的染料(呈蓝色),观察肠道杯状细胞数目,评价肠道粘液分泌功能。 我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和服用肠道粘膜辅助保护剂组。其中正常对照组未经任何处理,模型对照组与服用肠道粘膜辅助保护剂组都摄入了等量的TNBS(TNBS通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。服用肠道粘膜辅助保护剂组在TNBS诱导肠道粘膜损伤之后摄入类似的肠道粘膜辅助保护剂。服用一段时间肠道粘膜辅助保护剂后,我们观察和分析肠道杯状细胞数目。转基因NBT斑马鱼评价周围神经保护剂功效。中草药功效检测

利用斑马鱼模型评价多药耐药逆转作用【评价原理】大型疾病疗愈中一个普遍存在的问题就是多药耐药。在化疗引起的耐药机制中,肿瘤细胞的P-糖蛋白(P-gp)表达水平升高是主要机制之一。P-gp是一种细胞外转运子,P-gp表达水平升高会导致进入肿瘤细胞会很快被转运到细胞外,导致肿瘤细胞内的化疗药浓度达不到杀死肿瘤细胞的浓度,进而产生耐药性。让正常斑马鱼摄入荧光底物(呈红色),由于P-gp的存在,正常斑马鱼将荧光底物泵出体外,残留在体内的荧光底物很少;而用P-gp抑制剂环孢菌素A处理后,P-gp的活性受到抑制,P-gp荧光底物不能被排出,残留在斑马鱼体内的荧光底物增多。若某种药物能够增加荧光底物在斑马鱼体内的存留,则其可能是潜在的P-gp抑制剂。药物体外安全性评价关于药物功效的合理评价。

脑出血是指非外伤性脑实质内部血管破裂引发的脑内出血病症,占全部脑卒中的20%~30%,急性期病死率为30%~40%。羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)是他汀类药物发挥抑制作用的直接作用点,HMGCR功能被抑制会影响血管的完整性和稳定性,诱发脑出血。由于斑马鱼大脑具有典型脊椎动物脑部形态学特征,血管与神经系统在分子信号通路上与人和哺乳动物的同源性达到85%以上。在大量摄入辛伐他汀后,斑马鱼脑部也会出现脑出血的情况,患有脑出血的斑马鱼的脑部会出现明显的片状出血,而正常斑马鱼没有;由于脑出血斑马鱼的心搏输出量和血流速度也会降低,利用血流分析仪可明显观察到。脑出血可直接造成反应迟钝、运动功能障碍,可通过行为分析软件观察斑马鱼的行为轨迹。我们评价斑马鱼脑出血有4个指标:1.脑出血发生率;2.心搏输出量;3.血流速度;4.行为学(运动改善)。
糖尿病是一种由遗传基因决定的与肥胖等环境因素促发有关的疾病,其基本病理生理为肯定或相对性胰岛素分泌不足引起的代谢紊乱。斑马鱼胰腺的形态发生和基本细胞结构、排列方式类似于哺乳动物,斑马鱼食欲调节(如血清素)和胰岛素调节功能与人类相似,斑马鱼其他涉及葡萄糖体内平衡的***系统(包括脑、肝、脂肪细胞组织和骨骼肌)的发育和功能也与哺乳动物类似。斑马鱼在糖负荷状态下表现出持续血糖高现象,用高糖高脂饲料可以诱发斑马鱼血糖高,模拟人的二型糖尿病。用血糖仪对高糖高脂斑马鱼进行血糖检测。斑马鱼模型评价眼毒性。

我们将受测试斑马鱼分成三组,分别是正常对照组、模型对照组和药物组。其中正常对照组未摄入维拉帕米,模型对照组与药物组都摄入了等量的维拉帕米(维拉帕米通过溶解到养鱼用水中的方式摄入到斑马鱼体内)。药物组先摄入地高辛之类的改善心动过缓药物再摄入维拉帕米。服用改善心动过缓药物后再加入维拉帕米共同处理至实验终点后,我们对斑马鱼统计斑马鱼的心率。可以看到,模型对照组心率明显减慢,服用药物组的心率与正常对照组比较相似,没有明显的心率减慢。利用斑马鱼模型评价抗癫痫作用。药效学体外试验
药物毒性试验、毒理毒性检测评价。中草药功效检测
基于斑马鱼模型实验,可进行活性化合物发现、高通量药物筛选、药效评价、安全性评价、生物学质量控制等临床前研究,实验周期短、成本低,结果直观,助力医药企业的药物研发、品控及宣传推广。利用斑马鱼模型评价抗肿瘤作用【评价原理】近三十年来,世界**发病率以年均3-5%的速度递增,*类已成为人类**死因。1.**生长、转移将荧光标记的人肿瘤细胞(呈红色)移植到野生型斑马鱼体内,肿瘤细胞在斑马鱼体内的生长和转移情况可以被观察到。2.肿瘤部位新生血管将荧光标记的人肿瘤细胞(呈红色)移植到转基因血管荧光斑马鱼(呈绿色)体内,肿瘤细胞刺激斑马鱼新生血管情况可以被观察到。3.肿瘤细胞凋亡将人肿瘤细胞移植到野生型斑马鱼体内,通过特异性荧光染色(凋亡细胞呈绿色),细胞凋亡情况可以被观察到。4.肿瘤部位炎症将人肿瘤细胞移植到转基因中性粒细胞荧光斑马鱼(呈绿色)体内,肿瘤部位炎症反应可以被观察到。5.**病理将人肿瘤细胞移植到野生型斑马鱼体内,制作成病理切片,观察肿瘤细胞的形态变化。6.生存期将人肿瘤细胞移植到野生型斑马鱼体内,统计斑马鱼每日存活率、计算其生存期。中草药功效检测
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