15分钟。图4.扩展孵化（过夜）：SNAP i.d.8 2.0系统与标准免疫检测一种。 SNAP id.o 2.0蛋白检测b。标准系统Midi印迹免疫检测将A431细胞裂解液和大鼠肝裂解液（12至3 ug）转移至Immobilon9-P膜。两种印迹均用在TBST中制备的0.5％NFDM封闭。这SNAP i.d.c 2.0 Midi印迹被阻断20秒，标准印迹为分锁了1个小时。两种印迹均与相同稀释度的MAP激酶1/2（ErK1 / 2），但是，对于HRP偶联的二抗山羊抗兔（AP132P），将SNAP i.d.2.0印迹孵育10分钟在TBST中洗涤3次后，将标准印迹孵育1小时。 图5.扩展孵化（1小时）：，SNAP i.d.o 2.0系统1小时协议与SNAP i.d.9 2.0系统标准协议与标准免益启生物公司带您了解WB实验加速器详情。青浦区Merck细胞跨膜电阻仪Merck仪器哪家优惠
关闭真空。同样，溶液将被吸收到印迹架中，并且表面可能看起来干燥。重要提示：孵育10分钟后，再抽真空。11.向下压框架并施加真空。等待5至8秒钟，直到框架完全空了。真空运行连续添加30 mL洗涤缓冲液（对于MultiBlot为15 mL）。重复洗涤步骤3次（共3次）4次洗涤）。12.关闭真空，然后从框架上取下吸墨架。从污点固定器中取出污点，并与适当的检测试剂。如果使用了MultiBlot孔空白，则卸下并清洗。 扩展一级抗体孵育：一小时至过夜1.执行《通用议定书》的步骤1至5。2.加入2.5 mL（对于MultiBlot），5 mL（对于Mini blot）或10 mL（对于Midi blot）1X一抗（浓缩液）通常在标准免疫检测过程中使用）。3.用盖子盖住吸墨纸固定架。如果需要的话，将其从底座嘉定区Merck仪器规格上海益启生物的微流控细胞芯片分析仪公司电话。
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盘，请在步骤5之后插入托盘。有关详细信息，请参阅“抗体恢复”部分。 6.在整个表面上涂适量的一抗吸墨纸架的数量（对于MultiBlot为2.5毫升，对于迷你吸墨纸为5毫升，或10 mL用于Midi印迹）。7.在室温下孵育10分钟。解决方案将是吸收到污点固定器中，表面可能会变干。重要提示：请勿在吸尘器清洁后再使用真空吸尘器。孵育10分钟。8.向下压框架并施加真空。等待5-8秒，直到框架完全是空的。9.在连续运行真空的情况下，添加30 mL洗涤缓冲液（MultiBlot为15毫升）。重复洗涤步骤3次以上（总共4次洗涤）。当框架完全为空时，将TURN真空关闭。10.在印迹架的表面上涂适量的二抗（对于多印迹，为2.5 mL，5毫升用于迷你印迹，或10毫升用于Midi印迹）。在室温下孵育10分钟，然后上海益启生物公司干细胞计数器的优势。
润湿印迹。，对于大多数应用和大多数抗体而言，0.5％的脱脂/低脂干奶溶液可以提供足够的膜的阻塞。注意：请勿使用浓度高于0. 5％的干奶，因为它可能会导致吸墨纸架堵塞膜。如果使用其他封闭溶液，请参阅表5了解兼容性和推荐浓度。●在洗涤，封闭和抗体缓冲液中始终使用0.1％Tween8 20表面活性剂。这将减少溶液的表面张力，并确保孵育过程中抗体在印迹支架中的均匀分布。●由于SNAP i.d. @ 2.0系统中的免疫检测时间很短，因此建议在开始操作之前应准备一抗和二抗稀释液。●MultiBlot固定器所需的稀释抗体的总体积为2.5 mL，Mini blot固定器为5 mL，10 mL用于Midi印迹固定器。，每次需要洗30次（MultiBlot为15毫升），以确保每次洗完后都能完全清洗印迹孵化步骤。上海益启生物的超滤杯询价公司电话。静安区MerckAmicon搅拌式过滤器Merck仪器订购
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