加入漂洗缓冲液(体积是树脂柱床体积的7.5倍)并离心。< 500μL树脂时1,000×g离心1 min;≥ 500μL树脂时2,000×g离心4 min。
4. 使用一个新的50 mL离心管作为收集管。
5. 加入洗脱缓冲液(体积是树脂柱床体积的5倍)与树脂混匀并离心。< 500μL树脂时1,000×g离心1 min;≥ 500μL树脂时2,000×g离心4 min。回收管中即纯化好的蛋白。
6. 如果是纯化抗体,在纯化产物中加入中和缓冲液。
* 进行较大体积操作时,可以延长结合反应时间,并用胶带密封上样池上沿以便颠倒混匀操作。离心前去除胶带即可。选购不带Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管的Amicon® Pro时请使用目录号ACS500024。 益启生物公司专业 从事超滤浓缩管代理销售。黄浦区默克0.5ml超滤浓缩管咨询问价
浓度:当需要截留的样品浓度很低时,通量通常不受浓度影响。操作过
程中,随着溶质浓度的升高,增加的粘滞性和极化将导致通量降低。
温度:粗体,作为获得压力、浓度一样的词条通常增加操作时的温度可
以提高超滤效率。每增加 1℃蛋白扩散率增加 3-3.5%,同时溶液粘度降低。
实践中一般是以样品和设备能耐受的比较高温度来操作。
pH:改换溶液和 / 或 pH 常常改变分子结构,蛋白尤其如此。在蛋白的 pI
值蛋白会沉淀,产生堵塞和得率损失。
污垢:溶液中除了目的分子造成的浓差极化,还有其它小颗粒和分子会
在膜上富集和沉淀,逐渐堆积在膜孔上或膜孔结构中,形成结晶和沉淀。 长宁区离心浓缩管联系人超滤浓缩管和其他的空压机有什么区别呢?
高浓度样品浓缩
Centriprep®超滤管
Centriprep®超滤管是一次性使用的离心管,可以用于2-15mL生物样品的纯化、浓缩、脱盐等过滤应用。这种离心超滤管流速很快,设计紧凑,螺旋盖使用起来非常方便,过滤收集管内置低吸附的Ultracel®再生纤维素膜,装有气密盖。
优点与应用
特有的反向流操作模式,较大的死体积
采用Ultracel®膜,用于浓缩和纯化富含颗粒物
的高浓度样品,样品回收率>90%
配合标准的50mL离心管吊篮式转子使用
从发酵培养基、细胞培养基、细胞裂解液中分
离低分子量溶质
截留
截留有时也称为排阻。水合程度、离子和空间位置效应会导致分子量相近
的分子表现非常不同的截留状态。许多生物大分子在不同的 pH 或离子强
度改变的情况下倾向于聚集或改变构象,因此其有效大小可能比 “天然”
分子大恨多,从而导致排阻增加。比如,有些蛋白质在某些缓冲液条件下
会发生多聚化,而另一些则发生解聚(如血红素蛋白)成亚基。这使选择
合适截留分子量的膜变得复杂。以默克密理博的经验,我们通常推荐选择
为目的分子大小一半的膜作为尝试的优先,再根据实际情况加以调整。 上海超滤浓缩管供应商。
用超滤对分子进行分级
通过选定截留分子量的超滤操作能精确地将混在大分子中的小分子去
除的想法常常不切实际。事实上,膜的规格描述是基于截留而非通过
的性质。一项实验中,采用 100k NMWL 滤膜,大于 100kDa 的分子截
留率 >90%,但这时比膜孔径小的分子并不是完全自由地通过滤膜,
75kDa 的分子截留率为 83%,30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的
溶液中的各 种成分通过膜并不像单一成分的溶液那么简单和容易。实
践中,如果要分离两种大分子,它们之间的分子量差异应该达到 10 倍
以上,或至少膜的 NMWL 规格在两种蛋白之间,则可达到比较理想的
分离。如果蛋白溶液较为稀释,低压下操作也有助于达到更好的效果。 益启生物公司主要超滤浓缩管代理销售。黄浦区Merck离心浓缩管代理价格
超滤浓缩管的优点有很多。黄浦区默克0.5ml超滤浓缩管咨询问价
首先,Amicon® Ultra超滤管的蛋白比较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次,如果问题仍然出现,请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因:
1)如果目的样本在滤过液中,那么请排查:
a)是否选择了合适截留分子量的超滤管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)?
b)使用的离心力是否是在限定范围内?如果使用的是rpm,请换算成相应的g离心力,具体换算方法请垂询。
c)离心机**近是否有校准过?
d)是否***尝试这个蛋白? 黄浦区默克0.5ml超滤浓缩管咨询问价
上海益启生物科技有限公司办公设施齐全,办公环境优越,为员工打造良好的办公环境。专业的团队大多数员工都有多年工作经验,熟悉行业专业知识技能,致力于发展默克密理博,默克, 密理博, 西格玛 ,安倍, 罗氏, 普兰德 的品牌。公司以用心服务为重点价值,希望通过我们的专业水平和不懈努力,将 从事生物科技(除生物试剂)领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让;室内外装潢;建筑工程设计与施工;展览展示服务;计算机及配件、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、民用物品、易制毒化学品)实验室设备、服装服饰及辅料、仪器仪表、电子数码产品、普通劳防用品、文体用品的销售。等业务进行到底。诚实、守信是对企业的经营要求,也是我们做人的基本准则。公司致力于打造***的试剂,耗材,科研试剂,仪器设备。