核苷酸截留分子量(NCO)
超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的,适合各种蛋白研究,但在核酸
和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏
过,相对于球形蛋白需要更致密的膜(截留分子量更小)。所以选择
滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。
浓差极化
浓差极化实质是溶质累积在膜表面造成的堵塞,产生除了膜本身截留分
子量以外的过滤限制。当溶质浓度较高时,会形成相当于第二层滤膜作
用的胶体层,干扰分子通过滤膜,同时降低流速。pH 值、缓冲液的成分
也会影响目的分子的状态而使浓差极化现象加剧或减轻。
益启生物公司专业 从事超滤浓缩管代理销售。南京离心浓缩管联系人外泌体的精制磁珠法富集精制外泌体:300μg样品(相当于300μg总蛋白)用含有5μg anti-CD63抗体的溶液稀释,与protein A/G磁珠共孵育1hr,漂洗后用0.2M glycine洗脱。如果要先将抗体偶联在磁珠上(以避免抗体洗脱下来对外泌体的干扰),请参考默克磁珠操作说明书。(Protocol C - Antibody Crosslinking Using Bis(sulfosuccinimidyl) suberate (BS3))。推荐使用试剂目录号信息:cat# CBL553t 和cat# OP171以及LSKMAGAG02。
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如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话,那么有可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性(构象差异)而影响浓缩效果,建议选用上一分子量级别的超滤管(如原本选用30k,此时可以选择10k)。
2)如果目的样本也不在滤过液中,那么:
a)蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL? b)用来确定样本浓度的方法是什么?是否可信?
c)目的蛋白是不是沉淀了?如果是的,具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。
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近年来随着分离纯化技术的提高,关于外泌小体的研究成果颇丰;这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索,已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求,以及起始样品的规模、数量,可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒,对操作人员也没有特别的经验要求,超滤法后来居上,成为实验室中制备外泌体的通用方法。益启生物公司作为上海一家专业从事 超滤浓缩管代理销售。上海超滤浓缩管哪家优惠
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计,非特异吸附比较低,减少样品的吸附损失
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