北京广东数字PCR原理

研究方向

甲基化含量鉴定

作为表观遗传学研究中重要的一个研究方向——甲基化程度分析，现阶段有不同的方法或技术来进行研究：如传统的亚硫酸氢盐处理后的克隆测序统计法、抗体检测法、定量PCR检测法等。这些方法皆因方法学的问题而不能获得精确的定量，而微滴式数字PCR系统通过对样品的微滴化处理及目标因子的***拷贝数定量，为甲基化程度的精确定量检测提供了一种全新的技术。

 *****的伴随诊断

常用体液来源(如血液，胸腹水，唾液及尿液等)的待检标本中的DNA，有正常脱落体细胞和病变脱落细胞两种来源，前者的量远大于后者。通过微液滴处理能在每个微液滴中有效减少正常体细胞DNA的干扰，实现**标记物的有效检测，如EGFR，ALK，ROS1，KRAS、BRAF等基因的突变检测、乳腺*/胃*的HER2基因扩增检测等，应用于**精细医学的伴随诊断。 MicroDrop™数字PCR可广泛应用于科研、医疗、出入境检验检疫等领域。北京广东数字PCR原理

数字PCR可以直接计算目标序列的拷贝数，因此无需依赖于对照样品和标准曲线就可以进行精确的***定量检测；此外，由于数字PCR在进行结果判读时*判断有/无两种扩增状态，因此也不需要检测荧光信号与设定阈值线的交点，完全不依赖于Ct值的鉴定，因此数字PCR的反应受扩增效率的影响**降低，对PCR反应***物的耐受能力**提高；数字PCR实验中标准反应体系分配的过程可以极大程度上降低与目标序列有竞争性作用的背景序列浓度，因此数字PCR技术也特别适合在复杂背景中检测稀有突变。
国产数字PCR简介单张芯片一次可处理8个样本。

与常规的PCR的方法相比，dPCR有很好的优势。

***定量

常规PCR和实时荧光PCR定量检测都需要已知拷贝数的标准DNA制定标准曲线，由于样品测定在各种条件上不会完全一致，会造成PCR扩增效率的差异，从而影响定量结果的准确性。而ddPCR不受标准曲线和扩增动力学影响，可以进行***定量。

样品需求量低

在检测珍贵样品和样品核酸存在降解时具有明显的优势。

高灵敏度

ddPCR本质上是将一个传统的PCR反应分成了数万个**的PCR反应，在这些反应中可以精确地检测到很小的目的片段的差异、单拷贝甚至是低浓度混杂样品，且能避免非同源异质双链的形成。

高耐受性

由于目的序列被分配到多个微滴中，***降低了体系间的影响以及背景序列和***物对反应的干扰，扩增基质效应大大减小。

**个体化诊疗

通过检测T790M位点突变情况，可以更好地评估一代TKI***的疗效及耐药情况并指导第三代TKI靶向药Osimertinib的使用。然而，由于qPCR平台ARMS检测技术的灵敏度有限，没有办法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效准确的检测到T790M突变。这个时候dPCR技术展现出了****的检测精度，此外，dPCR***定量的优势也能充分发挥出来了，可以监控突变含量变化，做到及早发现耐药。

2.）基因表达分析

伊马替尼（Imatinib）可以有效帮助很多慢性髓细胞白血病（CML）患者延长生存期，但是临床上发现，伊马替尼的疗效与BCR-ABL1融合基因的转录产物表达量有很大的关系。研究人员采用dPCR对CML患者的BCR-ABL1融合基因转录产物进行测定，结果检测下限可以达到0.001%，显示出dPCR在痕量核酸检测方面比qPCR具有无可比拟的优势 采用主流可靠的解决方案，由微滴生成仪、微滴检测仪、数据分析软件组成。

与常规PCR方法相比，数字PCR有如下优势：

1. 能够***定量：常规PCR定量需要制定已知拷贝数的标准DNA曲线，但是由于待检样本与标准曲线不在统一体系，条件上会存在差异，另外加上PCR扩增效率的差异从而影响定量结果的准确性。而数字PCR不受标准曲线和扩增动力学影响，可进行***定量。

2. 样本需求量低：适用于珍贵样本或核酸降解严重的样本

3. 灵敏度高：数字PCR是将传统PCR反应体系分割成数万个**PCR反应，这些反应可以精确地检测很小的目的片段差异、单拷贝甚至低浓度的混杂样本。且能避免非同源异质双链的形成。

4. 高耐受性：由于目的序列被分配到多个**反应体系中，***降低了背景信号和***物对反应的干扰，扩增基质效应大大减小。 准确的定量结果和优异的重复性。北京MicroDrop-100数字PCR价格

适用复杂样品的检测。北京广东数字PCR原理

研究方向

低丰度及稀有序列的精确定量

目前对于低丰度目标序列的检测，定量PCR、杂交、毛细管测序及NGS等方法都因受到背景DNA的干扰，使得检测灵敏度及精确性都达不到精细定量的要求(如定量PCR检测中Ct值大于33的情况下，其重复性就不是很高)， 而微滴式数字PCR系统通过**的微滴化处理，使得稀有的核酸序列从大量的背景DNA中分离出来，从而提高了检测的灵敏度及重复性。

此外，由于样品微滴化处理的同时，也将样品中可能存在的***剂进行了分装，提高了数字PCR扩增对于***剂的耐受程度，因此可具体应用于很多临床样品(血液、尿液、粪便、痰液、脑脊液等)中对**核酸标记物的检测。一般而言，毛细管电泳和定量PCR的检测灵敏度约在10%;NGS的灵敏度可达到1%;而ddPCR的检测下限为0.001%。 北京广东数字PCR原理

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