数字PCR检测及分析原理在上世纪90年代就被提出来了,但是无奈受限于当时的技术条件,样本稀释及分配都是靠手工来完成的,受到很多因素的干扰和限制;并且结果分析对于研究者来说也十分枯燥与繁琐,因此在很长一段时间dPCR发展停滞不前。后来由于微流控技术与微纳集成制造工艺的发展解决了dPCR过程中的几个关键技术问题,推动了dPCR的研究与商业化的发展。
目前根据dPCR样本稀释分配的方式,基本可分为三大类,一种是基于大规模集成微流控芯片;第二种是使用微反应室/孔板;第三种是微滴式。但不论是走芯片式还是微滴式,其基本原理都是将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或者微滴当中,每个反应器的核酸模板数少于1或者等于1。经过PCR扩增之后,有一个核酸分子的模板的反应器就会给出荧光信号,没有模板的反应器没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积,可以推算出原始溶液的核酸浓度。 MiniDrop™研发团队由微流控、光学、机电学、化学、临床医学、分子生物学等多学科交叉领域的**组成。深圳广东数字PCR销售电话

基因检测**前沿的两种方法是:高通量测序(NGS)和数字PCR (dPCR)。
高通量测序技术又称“下一代”测序技术,可以一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定,功能强大,但是实验操作较复杂,数据分析难度较大,检测周期长,成本较高。数字PCR技术是目前**精细**灵敏的基因检测技术,借助微液滴或微腔室,通过单个模板分子的PCR扩增,可实现不依赖于标准曲线和参照样本的***定量。与NGS相比,数字PCR灵敏度高、检测速度快、操作简便、结果易读、成本低廉等优势使其更适合临床检测,成为精细医疗实现平民化、大众化的比较好选择。
此外,数字PCR还在基因表达差异研究、拷贝数变异(CNV)研究、低丰度DNA模板分子的精确定量、甲基化含量鉴定、二代测序辅助建库、CRISPR-Cas9基因编辑结果验证、转基因成分的检测、移植排异监控、肠道菌群分析以及***基因组检测等众多领域中有着优异的应用。
无锡永诺数字PCR解决方案单次微滴生成*需2分钟。

MicroDrop-100系统产品特点:
一、适应性广,灵活性高
1、理论上可覆盖qPCR(荧光定量PCR)的所有应用
2、样本多样性,样本通量可达96个样本,支持灵活设定
3、开放式平台,支持用户自行开发试剂、产品。
二、灵敏度高,准确性高
1、***定量——无需依赖标准曲线
2、采用微滴式技术高达100,000个的微滴
3、线性范围达到6个数量级,灵敏度高达万分之一
三、可分析复杂混合物
1、准确度不完全依赖于扩增效率
2、双通道荧光检测,支持EvaGreen染料及探针法
3、支持多重数字PCR
四、操作简单,使用方便
1、全封闭防污染设计,一键式自动化操作。
2、可选全中文分析软件
每种PCR方法对比如下:
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数字PCR |
实时荧光定量PCR |
传统PCR |
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概述 |
测量阴性平行样的比例以确定***拷贝数 |
在发生PCR扩增时进行测量 |
在PCR循环结束时测量积聚的PCR产物的量 |
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是否定量 |
是,阴性PCR反应的比例适合泊松统计算法 |
是,因为在PCR的指数期内采集数据,在此期间PCR产物的数量与核酸模板量成正比 |
否,但是比较凝胶上的扩增条带的强度与已知浓度的标准品可进行半定量 |
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应用 |
***载体***定量 核酸标准品***定量 下一代测序文库***定量 稀有等位基因检测 基因表达***定量 混合物富集和分类 |
基因表达定量 质量控制和检测验证 病原体检测 SNP基因分型 拷贝数变异 microRNA分析 ***定量 siRNA/RNAi实验 |
DNA扩增 基因分型 分子克隆 能检测低至0.01%的突变基因。 |

定量PCR和数字PCR的特点:
样本多样性,样本通量可达96个样本,支持灵活设定。深圳广东数字PCR销售电话
数字PCR采用的策略概括起来非常简单,就是“分而治之”(divide and conquer)[1],这种做法非常类似于计算机科学中的“分治算法”,将一个标准PCR反应分配到大量微小的反应器中,在每个反应器中包含或不包含一个或多个拷贝的目标分子( DNA模板) ,实现“单分子模板PCR扩增”,扩增结束后,通过阳性反应器的数目“数出”目标序列的拷贝数。在实际的数字PCR实验中,事实上是通过呈现两种信号类型的反应器比例和数目进行统计学分析,计算出原始样本中的模板拷贝数。
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无创产前检查镰状细胞贫血(sicklecellanemia)是HBB基因突变引起的常染色体显性遗传病,有严重的危害,可以导致高达5%的胎儿死亡率及4.62%的孕妇死亡率 。而精细有效的无创产前诊断是预防镰状细胞贫血患儿出生的有效方法。研究人员采用dPCR技术检测孕妇胎儿游离DNA(cff-DNA)HBB基因突变。结果显示,dPCR技术能够确定87%的男性胎儿(n=45)和75%的女性胎儿(n=20)HBB基因的突变状态。当cff-DNA浓度大于7%时,可以**的检测出HBB基因突变[3],可以说是相当厉害了。浚和(上海)仪器科技有限公司为您提供数字PCR ,有需求可以来电咨询!广东立式数字PC...