外泌体等细胞外囊泡(EVs)是疾病诊断的潜在生物标志物来源。其分离和表征通常繁琐。均相化学发光技术提供了快速分析方案。利用EVs表面普遍或特异性表达的膜蛋白(如CD9、CD63、CD81或相关抗原),将针对不同蛋白的抗体分别偶联Alpha供体珠和受体珠。当EVs存在时,多个抗体结合到同一个EV上,拉近微珠产光信号,从而实现EVs的定量。通过使用不同抗体组合,还可以对EVs进行亚群分型分析。这种方法无需超速离心,操作简单,有望用于临床样本的快速筛查。均相化学发光的检测速度如何,能否满足快速诊断需求?广东诊断试剂均相发光与普通发光的区别

离子通道和转运体是重要的药物靶点,但传统电生理方法通量极低。基于化学发光的离子敏炎症料或蛋白,为高通量筛选提供了可能。例如,使用对钙离子敏感的水母发光蛋白(Aequorin)或基于荧光素酶的钙指示剂(如Photina)。当离子通道开放引起离子内流时,会触发这些蛋白的化学发光反应。将稳定表达该报告系统和目标离子通道的细胞系用于筛选,加入化合物后直接测量发光信号变化,即可高通量地发现通道的激动剂或阻断剂。类似原理也可用于钠、钾等离子通道或某些转运体的功能研究。北京技术升级均相发光与普通发光的区别浦光生物均相化学发光技术在免疫检测中的应用有哪些创新点?

适配体是通过SELEX技术筛选得到的单链DNA或RNA分子,能高亲和力、高特异性结合靶标。将适配体与均相发光技术结合,产生了新型生物传感器。例如,可以设计一个分子信标式适配体:其两端分别标记荧光供体和淬灭基团,在没有靶标时结构闭合,FRET发生,信号淬灭;结合靶标后构象打开,荧光恢复。或者,将适配体与发光酶(如荧光素酶)融合,靶标结合引起构象变化,从而活化或抑制酶活性。这类均相适配体传感器在生物小分子、离子甚至细胞检测中展现出巨大潜力。
均相化学发光技术的实现,主要依赖于两种设计哲学。第一种是直接能量转移路径,表示技术为AlphaLISA/AlphaScreen。其关键是使用能产生单线态氧的供体微珠和含有化学发光剂的受体微珠。只有当生物识别事件将两者拉近至200纳米以内时,供体产生的单线态氧才能有效触发受体珠内的化学发光反应。未结合的微珠因距离过远,单线态氧在扩散途中淬灭,不产生信号。第二种是活性调控路径,即生物识别事件直接调控化学发光反应的效率或速率。例如,将化学发光反应的催化剂(如酶)或其抑制剂/共反应物与生物分子偶联,当目标分子存在导致它们接近或分离时,化学发光信号被开启或关闭。这两种路径均巧妙地利用“临近”或“调控”将特异性识别与信号产生直接耦合。医疗新时代!均相发光,助力疾病早筛早诊!

Alpha(Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay)技术是均相化学发光的典范。其供体珠中装载光敏剂,在680nm激光激发下,将周围环境中的氧分子转化为高能量、短寿命(约4微秒)的单线态氧。单线态氧在溶液中的扩散半径只约200纳米。受体珠中则装载了化学发光剂(通常是噻吩衍生物)和荧光接收体。当单线态氧扩散进入邻近的受体珠,会触发一系列级联反应:化学发光剂被氧化并发光,该能量随即传递给荧光接收体,比较终发射出波长更长(520-620nm)、特征更明显的荧光。这个能量转移和放大的过程,使得一个单线态氧分子能引发大量发光分子的发射,实现了信号的有效放大,因此灵敏度极高。均相化学发光技术的未来发展趋势是什么?广东诊断试剂均相发光与普通发光的区别
浦光生物冻干试剂,灵敏度高,特异性强,实验结果更可靠!广东诊断试剂均相发光与普通发光的区别
化学发光共振能量转移(CRET)是另一种重要的均相信号产生机制。它本质上是一种无需外部光激发的内源性FRET。在CRET中,供体是化学发光反应产生的激发态分子(如氧化的鲁米诺或吖啶酯),其发射的光子能量直接传递给邻近的荧光受体(如荧光染料、量子点或纳米材料),促使受体发射出波长红移的荧光。在均相检测设计中,可将化学发光分子与受体分别标记在相互作用的生物分子对上。只有当目标分子存在并促使两者结合时,供体与受体才能充分靠近,发生有效的CRET,产生特征性的受体荧光信号。通过检测受体荧光,可以避免直接化学发光可能存在的背景干扰,并获得更佳的光谱分辨能力,利于多重检测。广东诊断试剂均相发光与普通发光的区别
激酶是重要的药物靶点,其活性检测是药物筛选的关键。均相发光技术,尤其是TR-FRET和Alpha技术,为此提供了理想平台。以TR-FRET为例:将待测激酶、底物肽、ATP与待筛选化合物共同孵育。体系中包含两种抗体,一种针对磷酸化底物(带供体标记),另一种针对底物肽的标签(带受体标记)。只有当激酶活性正常,底物被磷酸化后,两个抗体才能同时结合到底物肽上,使供受体靠近产生FRET信号。若化合物能抑制激酶,则磷酸化水平下降,FRET信号减弱。这种方法无需分离,可直接在含有ATP、激酶和化合物的混合液中实时或终点法检测,通量极高,是发现激酶抑制剂的主流手段。均相化学发光在疾病早期筛查中能发挥怎样的作用...