对于二代测序的概念是什么?
第二代测序(Next-generationsequencing,NGS)又称为高通量测序(High-throughputsequencing),是基于PCR和基因芯片发展而来的DNA测序技术。我们都知道一代测序为合成终止测序,而二代测序开创性的引入了可逆终止末端,从而实现边合成边测序(SequencingbySynthesis)。二代测序在DNA复制过程中通过捕捉新添加的碱基所携带的特殊标记(一般为荧光分子标记)来确定DNA的序列,现有的技术平台主要包括Roche的454FLX、lllumina的Miseq/Hiseg等。2005年,罗氏推出了二代测序仪罗氏454,生命科学开始进入高通量测序时代。2006年,随着Ilumina系列测序平台的推出,极大降低了二代测序的价格,推动了高通量测序在生命科学各个研究领域的普及。 二代测序实验与测序原理是什么?湖南嘉安健达二代测序运用
①二代测序一般多久出结果?
二代测序(Next-GenerationSequencing,NGS)出结果的时间会受到多种因素的影响,一般在数天到数周不等。
1、样本类型和质量
不同的样本类型处理时间不同。例如,血液样本相对容易处理,提取DNA的过程比较常规。如果是组织样本,可能需要先进行样本的解离等复杂操作。如果样本质量高,DNA提取和文库构建等前期工作会比较顺利,能加快整体进程。但如果样本量少或者DNA有降解等质量问题,可能需要重新提取样本或者进行DNA修复等操作,这会**延长时间。例如,对于新鲜血液样本,DNA提取可能在1-2天内完成;而对于一些福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织样本,可能需要3-5天来完成高质量DNA的提取和后续的优化处理。
河南哪里有二代测序denovo测序是二代测序吗?
二代测序用于蛋白组测序的优势
高通量:二代测序本身具有一次性处理大量核酸序列的能力,在结合蛋白组测序相关应用时,能快速获取大规模的转录组数据,进而可以对众多潜在的蛋白质信息进行分析推断,相比传统逐个蛋白分析的方法,**提高了效率,能够在短时间内覆盖更***的蛋白组范围。
能发现新蛋白及异构体:借助对转录组的深度测序,可以挖掘出一些新的转录本,这些转录本有可能翻译出全新的蛋白质或者产生蛋白质异构体,有助于拓展对蛋白组复杂程度的认知,发现那些以往可能被遗漏的蛋白质种类和形式。
二代测序用于蛋白组测序面临的挑战
数据解读复杂性:二代测序产生的转录组数据量极其庞大,要从中准确挖掘出与蛋白组实际情况紧密相关的有效信息并不容易,需要运用复杂的生物信息学算法和工具进行数据分析、比对、注释等操作,而且从转录组信息到准确推断蛋白质情况还存在诸多不确定因素,比如可变剪接、翻译后调控等都会干扰解读。
定量不准确问题:虽然能通过转录组测序推测蛋白表达量趋势,但这种定量并非直接对蛋白质本身的精确测定,与实际蛋白质的真实含量存在偏差,而且不同样本间、不同实验批次间的转录组定量数据的稳定性和可比性也有待进一步提升,难以像专门的蛋白定量技术那样精细反映蛋白量的变化。 二代和三代测序的区别?
宏基因组二代测序,你了解多少?
宏基因组二代测序(mNGS)是一项覆盖病原谱广且高通量的检测技术,已在临床领域得到了广泛的应用。对于血液病患者,病原mNGS通过对样本快速高通量测序,可以获得更准确、相对无偏倚的病原信息,对病原诊断起到积极的作用,尤其对传统微生物学检测未覆盖到或检测周期较长、阳性率较低的病原可提高检出率。对于临床相关样本应首先完善传统微生物学检测,病理、无菌标本培养仍然是诊断的金标准,病原mNGS是对传统微生物学检测的有力补充和延展而非替代。病原mNGS的报告解读应充分评估检出微生物的致病性、流行病学、生物信息学信息,同时在结合患者临床特征的基础上进行综合判断。 二代测序是一种能够同时对数百万甚至数十个亿DNA片段进行测序的方法。广西嘉安健达二代测序运用
二代测序与Sanger测序相同吗?湖南嘉安健达二代测序运用
二代测序不同应用场景下的速度有多快?
病原微生物检测:一般来说,二代测序用于检测病原微生物时,能够在几个小时到一天左右出结果。比如在快速检测血液中的病原微生物时,通常可以在几个小时内获得检测结果,相比传统的血液培养方法,时间大幅缩短,传统血液培养一般需要几天到一周的时间 。
全基因组测序:如果是对人类全基因组进行测序,以目前的技术水平,使用二代测序技术完成一个人的全基因组测序,一般需要 1-2 天左右的时间。而在十几年前,人类全基因组测序计划***完成时,耗费了大量的时间和精力,相比之下二代测序技术的速度提升***。
转录组测序:转录组测序的时间相对较短,一般几个小时内可以完成对大量 RNA 分子的测序和初步数据分析,进而快速了解基因在特定条件下的表达情况8. 湖南嘉安健达二代测序运用