12000rpm离心1分钟;倒弃收集管中废液,加入500 ul漂洗液,12000rpm离心1分钟;倒弃收集管中废液,加入500 ul漂洗液,12000rpm离心1分钟;倒弃收集管中废液,12000rpm离心3分钟,将离心柱转移至新的离心管中,70℃加热3分钟;加入20 ul洗脱液,70℃加热3分钟;12000rpm离心1分钟,丢弃离心柱,离心管中液体即为DNA溶液。 2)PCR扩增及电泳 PCR扩增使用Identifiler Plus试剂盒,10 μl扩增体系中含4 μl master mix、2 μl primer set、4 μl模板,扩增程序为,95℃,11分钟;94℃,20 秒,59℃,3分钟,30个循环;60℃,10分钟;4℃保存;电泳在ABI 3500XL仪器中进行;电泳上样体系为,1 μl PCR产物,9 μl甲酰胺,其中已加Liz。 实施例4 以石英膜提取土壤尿液DNA 1)DNA提取 刮取含有尿液的表层土壤,烘干,上海益启生物的土壤DNA提取询价公司电话。松江区土壤DNA土壤DNA提取批发
reps。货号:11**3**50、11***00*0。绝招一:独特的裂解介质管,由三种不同粒径的研磨珠组成,提供的剪切力可以高效打开难裂解的菌体,促进核酸的释放,以保证微生物多样性。样本裂解均匀,以保证实验的平行性和稳定性。绝招二:独特的裂解液体系,多种裂解液相互配合,能有效裂解菌体细胞,保护DNA完整性,并去除污染RNA。绝招三:独特的抑制物去除体系,在DNA与柱膜结合前去除大部分腐殖酸,能够有效改善高腐殖酸含量样本DNA的提普陀区土壤DNA土壤DNA提取批发上海益启生物公司土壤DNA提取的优势。
8000rpm离心1分钟,上清DNA溶液转移至新的离心管中。 2)PCR扩增及电泳 PCR扩增使用Identifiler Plus试剂盒,10 μl扩增体系中含4 μl master mix、2 μl primer set、4 μl模板,扩增程序为,95℃,11分钟;94℃,20 秒,59℃,3分钟,30个循环;60℃,10分钟;4℃保存;电泳在ABI 3500XL仪器中进行;电泳上样体系为,1 μl PCR产物,9 μl甲酰胺,其中已加Liz。 实施例2 以硅胶膜提取土壤尿液DNA 1)DNA提取 刮取含有尿液的表层土壤,烘干,取100-200 mg土壤样品,加入样品管中,然后加入400 ul土壤裂解液和20 ul 蛋白酶k,震荡混匀后,75℃加热裂解15分钟;最大转速离心5分钟,将上清液转移至新的样品管中,加入800 ul结合液,混匀;混合液转移至装有硅胶膜的离心柱中,12000rpm离心1分钟;倒弃收集管中废液,加入500 ul漂洗液,12000rpm离心1分钟;倒弃收集管中废液,加入500 ul漂洗液,12000rpm离心1分钟;倒弃收集管中废液,12000rpm离心3分钟,将离心柱转移至新的离心管中,70℃加热3分钟;加入20 ul洗脱液,70℃加热3分钟;12000rpm离心1分钟,丢弃离心柱,离心管中液体即为DNA溶液。 2)
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调节样本的含水量等因素来优化裂解条件·裂解不充分:增加物理破碎的时间和次数。·检查洗涤液中是否加入乙醇。·洗脱不充分:建议二次洗脱增加产量或提高洗脱体积。问题3:提取的DNA无法扩增怎么办?解决思路:· 检测DNA的浓度:过量的DNA模板也会抑制PCR反应。·样本DNA稀释之后可以扩增:样本中的腐殖酸等抑制物含量高。·确定PCR反应条件是否已优化:退火温度,时间,引物等等。·非特异条带:洗脱液中目的DNA的丰度可能比较低上海益启生物公司是有授权的土壤DNA提取公司吗?金山区FastDNA Spin Kit土壤DNA提取订购
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游实验。产品特点:1、适用于不同类型土壤及其他环境样品。2、不受腐殖质干扰。3、30min-60min内即可获得高产量的DNA。4、DNA纯度高,并直接用于下游实验。5、不含有毒有害的试剂成分。案例研究:材料准备:1.西红柿栽盆2.淤泥3.沙土4.松树下5.棕榈树下6.花园7.尼罗河百合花栽盆8.草坪9.柠檬树下10.鳄梨树。实验结果:500mg样本经过试剂盒提取的总DNA在1.2%琼脂糖凝胶电泳(0.5×TAE)。通过琼脂糖凝胶图中我们可以看出,不论是哪种松江区土壤DNA土壤DNA提取批发
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