大肠杆菌摇瓶发酵常用的化学合成培养基有LB、SOB、SOC等。培养基中通常含有碳(能)源、氮源,以及微营养物如微生物和微量元素,这些营养物的浓度与比例,对实现生产重组微生物的高密度发酵是很重要的。培养基中复合氮源的种类对重组大肠杆菌的高密度发酵也很重要。在某些情况下,向培养基中添加一些营养物质能提高生产率。这些营养物的作用可能是作为产物前体,也有可能是阻止产物的降解。发酵过程:1、种子活化:将保存于-80℃的种子甘油菌室温解冻,取500ul菌接入50mlLB培养基,再加入相对应的筛选抗性,37℃培养7h。2、上罐:将上步活化的种子50ml接入3L发酵培养基中,设定温度,空气流量,压力值,监控DO与PH值。3、从发酵4小时开始,每隔1h进行取样检测OD,当OD值≥40时,开始诱导。4、诱导物:IPTG(1mol/L,过滤除菌),加入4ml,至终浓度达到1mmol/L,诱导阶段温度控制再35℃,其他条件不变,诱导10小时。5、诱导结束,放罐,5000rpm离心,收集菌体,于-80℃冰箱保存。金黄色葡萄球可用来做消毒效果评价指示菌片。细线羧酸利用杆菌
金黄色葡萄球菌的分类与分型:根据生化反应和表皮葡萄球菌产生色素不同,可分为金黄色葡萄球菌(S、表皮葡萄球菌(S和腐生葡萄球菌(S三种。其中金黄色葡萄球菌多为致病菌,表皮葡萄球菌偶尔致病,腐生葡萄球菌一般不致病。60%~70%的金黄色葡萄球菌可被相应噬菌体裂解,表皮葡萄球菌不敏感。用噬菌体可将金葡萄菌分为4群23个型。肠有害元素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金葡萄菌引起,Ⅱ群菌对维生素产生耐药性的速度比Ⅰ和Ⅳ群缓慢很多。造成医院传染严重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和81型菌株。引起疱疹性和剥脱性皮炎的菌株经常是Ⅱ群71型。土壤深黄单胞菌菌种当铜绿假单胞菌通气足够的时候可以产绿色的色素。
大肠杆菌是大多数动物肠道内正常菌群中的一种,可以在动物体内发酵葡萄糖产酸、产气,能发酵多种碳水化合物,也可以利用多种有机酸盐。大部分大肠杆菌都是没有危害的,但是还是有一小部分大肠杆菌却在体内能引发疾病,我们称之为致病性大肠杆菌。那么,为什么这类大肠杆菌能致病呢?它们一定在结构和生物性质上存在一些特征,才导致具备一些特殊的功能。我们首先从这种细菌的结构上说起!致病性大肠杆菌在夹馍外存在着菌毛,而这些菌毛可以帮助致病大肠杆菌附着在肠道壁上,在其他没有菌毛助力的细菌随着消化的食物从肠道中当作粪便排泄出去的时候,致病性大肠杆菌可以停留在肠道壁上增殖。我们将此过程称为“定植”。现今被发现的致病性大肠杆菌的菌毛多达50多种,每一种菌毛都要在肠道黏膜表面上寻找相应的受体才可以在相应动物的肠道壁上定植下来。因其只跟特定的受体结合,所以不同的菌毛类型决定了带有这种菌毛的大肠杆菌特异性地定植在处在不同生长阶段的不同类型的动物身上。对人和多种动物来讲,对人有致病作用的菌株常常是很少引起动物的染上,反之亦然,据此可将病原大肠杆菌大致上将其划分为两种:即人病原大肠杆菌和动物病原大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌产生的耐热性肠有害元素简称SEs,是由血浆凝固酶或耐热核酸酶阳性的菌株所产生的一类结构相关、毒力相似、抗原性不同的胞外蛋白质。有A-E、G-V及X型(即SEA等),其中C型抗原又分为3个亚型(C1、C2、C3),SEG、SEI、SEK为新发现的肠有害元素。所有的有害元素都有以下共同特性:具有引起急性胃肠炎的能力(催吐性);刺激非特异性T细胞增殖的超抗原特性;对热和蛋白酶消化作用的抵抗能力(即肠有害元素对热和水解酶的变性都有很高的耐性);分子内都存在二硫键。金黄色葡萄球在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。
大肠杆菌对于药物产生抗性的过程也就是遗传基因的表达过程、质粒是存在于细菌细胞内单独染色体之外的遗传物质,是共价闭合环状双螺旋DNA分子、携带有耐药性基因的质粒称为耐药性质粒,耐药性质粒根据能否通过接合作用进行传递而分为接合性质粒(R质粒)和非接合性质粒(r质粒),接合性R质粒为耐药菌株的传播提供了物质基础,而r质料虽然不能通过接合作用进行传递,但可以通过噬菌体转导进行传递、此外,当r质粒与R质粒共同存在于一个菌细胞内时,在一定条件下r质粒可以被诱导而随同R质粒一起进行传递。另外,一个耐药性质粒可以携带多个耐药性基因,故一次传递就可使受体菌获得对抑菌药物的抗性、大肠杆菌的多重耐药性主要由接合性R质粒决定、耐药谱越广,R质粒检出率越高、R质粒越稳定,活性也越强,R质粒也越容易传播、大肠杆菌在人和动物的肠道中大量存在,因此它们携带的R质粒会在人与动物间、动物与动物间传递,使得由耐药菌引起的疾病流行不止。铜绿假单胞菌属于非发酵革兰氏阴性杆菌。热葡糖苷地芽孢杆菌
用分子生物学方法在大肠杆菌得出的结论可用于其它生物的研究。细线羧酸利用杆菌
大肠杆菌长数微米,呈杆形,至早可能于1、3亿年前与哺乳动物同时出现,并就势大摇大摆地定居于后者的肠道中。所以,当不到20万年前智人开始在地球上行走时,大肠杆菌早已是他们肚子里的老居民了。据估算,现今,我们星球上大肠杆菌总数以数万亿亿计,占全部细菌总数的100亿分之一。它们中的一半与其他细菌杂居共处,舒适地栖居在哺乳动物的大肠里:人类、小牛犊、母牛、猪……还有鸟和一些鱼类及爬行动物,所有的脊椎动物都榜上有名。可是尽管如此,这些生物却毫无怨言,因为大肠杆菌和它的伙伴并不是寄生菌,而是“共生菌”,它们在对我们无害的前提下,从我们的肠道里直接攫取所需物质。细线羧酸利用杆菌
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