深圳正规细胞高效转染试剂厂家直销

细胞转染操作方法：转染 ，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；化学介导方法很多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种细菌介导的转染技术。理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。细菌介导的转染技术，是目前转染效率较高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，细菌转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。对于原代细胞，可用促有丝分裂刺激物进行细胞活化。深圳正规细胞高效转染试剂厂家直销

瞬时转染和转染效率的监测：基因的瞬时表达在24-72小时内就结束了。这种快速的瞬时表达非常适用于验证质粒表达和监测转染步骤的效率。可以使用报告基因来确定优化条件，其表达蛋白易检测，在目的细胞中不含此蛋白或水平很低。常用的报告基因包括氯霉素乙酰转移酶（CAT），绿色荧光蛋白（GFP），荧光素酶（Lux或Luc）以及b- 半乳糖苷酶（b-gal）。可以使用简单的非同位素方法检测b-gal的表达以测定转染效率和活性。pCMV SPORT- bgal质粒包含CMV启动子调控下的LacZ基因，转染入真核细胞内后可以直接表达bgal。结合简单的检测步骤，可以做为监测转染条件的一种方便灵敏的方法。成都细胞高效转染试剂厂家推荐脂质体可以和带负电荷的核酸结合后重新形成复合物。

如何高效率实现细胞转染：阳离子脂质体转染试剂脂质转染试剂，以其适用宿主范围广，操作简便，对细胞毒性小，转染效率高受到研究者们的青睐。脂质体（liposome）是一种人工膜，在水相中形成具有双分子层结构的球形封闭囊泡。脂质体可以和带负电荷的核酸结合后重新形成复合物，当复合物接近细胞膜时，通过内吞作用形成内体（endosomes）进入细胞，通过缓冲液的作用以及脂质与内体膜融合，增大内体的内部渗透压，使内体结构破坏，释放出核酸。随后DNA复合物被释放进入细胞核内。对于普通细胞系，一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。利用脂质体转染法较重要的就是防止其毒性，因此脂质体与质粒的比例，细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要因素，通过实验优化合适的转染条件对于转染效率的提高很重要。

细胞转染效率低下的几个大坑：1.试剂过期有时候转染效率低下，还要考虑会不会存在试剂过期的情况。毛博当年做转染整整半年，百思不得其解。较后发现，原来是Lipofectamine 2000过期了。换了之后，立马成功。根据我的经验，尽量使用开封半年内的，因为过了半年后，就算没有过失效期，但是细胞毒性较大增加，而转染效率却较大下降。千万不要为了省钱，影响实验进度哈。2.未加血清转染后未及时加入血清，会导致细胞大量死亡。一般要在转染后的4-6小时换液且换为有血清的培养基。根据毛博的经验，其实也可以在原来的无血清培养基里面滴加血清。这个时候，较好不要换液，不要打扰细胞，让它安安静静地休息。但是也不能过早加入血清。过早的话，会引起未转染的细胞疯狂生长。那么，什么是较佳时机呢？在20%的细胞变圆的时候，就是加血清的较佳时机。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。

细胞转染：(1)转染试剂的准备A.将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。B.震荡后将试剂放在-20摄氏度保存，使用前还需震荡，。(2)选择合适的混合比例(1：1-1：2/脂质体体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。(3)将混合液在室温放置10—15分钟。(4)吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。(5)加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。(6)到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24-48小时。震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。南昌细胞高效转染试剂进货价

一般的瞬时转染 方法多采用脂质体法。深圳正规细胞高效转染试剂厂家直销

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