外泌体miRNA调控胰岛素敏感性:肥胖引起的慢性组织炎症是胰岛素抵抗和2型糖尿病的根本原因。9月份,Cell上发表的这项研究发现外泌体介导的细胞间通讯导致了糖尿病中的代谢紊乱,外泌体携带的miRNA参与了糖尿病产生的关键机制。文章里进行的实验都是经典且具说服力的外泌体研究实验,比如*证明外泌体成功提取就用了电镜、NTA和Westernblot标志物检测3个实验。作者在实验方法部分也提到,他遵循的是ThéryC等外泌体科学家建立的外泌体知识库EV-TRACK的实验建议,可谓“学院派”外泌体研究,颇具学习参考价值。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点。珠海外泌体提取试剂推荐厂家
外泌体与免疫系统:不同的细胞来源的外泌体,包括免疫细胞(B细胞和树突状细胞)、病细胞、上皮细胞和间充质细胞,释放出带有载体的外泌体,可影响先天免疫系统和适应性免疫系统中受体细胞的增殖和各自的活性。CD4+和CD8+T细胞可直接或间接地受到外泌体的影响,刺激或压制其增殖和功能。外泌体与代谢性和心血管疾病:外泌体可以通过携带miRNA或代谢物分子在代谢性疾病和心血管疾病的发生的发展过程中起作用。体外培养心血管疾病的细胞收集的外泌体与疾病相关的代谢适应有关;体外培养的间充质干细胞和胚胎干细胞的外泌体具有保护心血管的作用。这些发现表明不同来源的外泌体可以通过传递miRNA,蛋白等物质改变受体细胞的代谢状态。厦门正规外泌体提取试剂厂家批发价通过离心筛选初步去除体液中的细胞成分和细胞碎片,制成体液样本备用。
为了分离外泌体,研究人员用两个这样的单元串联构建了一个装置。首先,使用声波从血液样品中除去细胞和血小板。一旦细胞和血小板被去除,样品进入第二个微流体单元,然后使用较高频率的声波将外泌体与稍大的细胞外囊泡分开。这项工作的通讯作者之一,麻省理工学院材料科学与工程系科学家MingDao博士说:“声波更温和。而且在分离时,这些囊泡受处理的时间只有1秒钟或更短。这是一个很大的优势。”使用该设备,处理100微升未稀释血液样本只需要不到25分钟。“这种新技术可以解决当前外泌体分离技术的缺点,如周期长,一致性差,产量低,污染以及完整性受损等。我们想要把提取高质量的外泌体的过程简化为按一个按钮就在10分钟内获得所需样品一样简单。”研究人员们说。
有的外泌体分离方法需要高速离心,需要使用大型机器,耗费近24小时的时间才能获得,非常不便。而高离心力也可能破坏囊泡。降低样品的质量。这项研究有望解决这一难题。在论文中,研究人员们提供了一种通过微流体和声学的独特组合从体液样品中捕获外泌体的新颖方法。他们开发的原始声学分选装置由两个倾斜的声学换能器和一个微流体通道组成,当这些传感器产生的声波相互碰撞时,形成产生一系列压力节点的驻波。每当细胞或颗粒流过通道并遇到一个节点时,压力会将细胞引导离开中心一点点。细胞移动的距离取决于大小和其他属性(如可压缩性),这样,当到达通道末尾时,不同大小和性质的细胞就能够被分离开来。这种方法分离得到的外泌体,基本上不改变其生物或物理特征,为开发评估人类健康以及疾病诊断和进展提供了有吸引力的新方法。外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响,不利于下游实验,难以普遍普及。
外泌体作为RNAi药物载体的疗效:这项研究,检测了利用exosomes作为RNAi靶向药物的效果,并证明了这个过程中exosomes进行免疫逃逸的机制:对exosomes进行基因修饰(命名为iExosome),装载上靶向胰腺病细胞KRAS突变基因的RNA干扰药物,在小鼠模型上进行试验,结果表明,iExosome比同样经过修饰的脂质iLiposome递送效果更好,能够压制侵袭性胰腺病生长;这得益于exosomes表面的CD47,它能够阻止exosomes在血液循环系统中被单核细胞清理。这项研究结果对致力于exosomes转化医学的科学家来说,可谓振奋人心!如何高效地提取外泌体是实现这项新兴液体活检技术临床常规化应用的关键。厦门正规外泌体提取试剂厂家批发价
获得的外泌体纯度较高,但步骤繁琐,耗时。珠海外泌体提取试剂推荐厂家
人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体,包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时,外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式:一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合,进而启动靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中,外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合,从而启动细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合,非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。珠海外泌体提取试剂推荐厂家
具体步骤是:以下所有步骤都在4℃下进行,1、300×g10min,弃沉淀,去除细胞2、2000×g20min,弃沉淀,去除死细胞3、10,000×g30min,弃沉淀,去除细胞碎片等亚细胞成分4、10,000×g70min,弃上清,沉淀即为外泌体5、PBS(每10ml细胞培养液用30mlPBS重悬)清洗沉淀物,混匀,10,000×g70min6、lmlPBS溶解沉淀(外泌体),立即使用或置于-80℃备用。7、一般超速离心法会结合密度梯度离心,这样得到的外泌体更纯,具体做法第4步后蔗糖梯度离心,10,000×g70min,以去除密度大于1.21g/ml的颗粒。优点是:成本低,操作简单,获得的囊泡...