目前的主流观点认为,外泌体的产生过程为:细胞膜内陷,形成内体(endosome),再形成多泡体(multivesicularbodies,MVB),较后分泌到胞外成为外泌体。外泌体中携带有母细胞的多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息。外泌体较早见于1981年,EGTrams等在体外培养的绵羊红细胞上清液中发现了有膜结构的小囊泡,并命名为exosome。对于外泌体的作用,当时推测为细胞排泄废物的一种方式。1996年GRaposo等发现类似于B淋巴细胞的免疫细胞也会分泌抗原呈递外泌体(antigenpresentingvesicle),所分泌的外泌体可以直接刺激效应CD4+细胞的抗一些病症反应。2007年HValadi等进一步发现细胞之间可以通过外泌体中RNA交换遗传物质。随着有关外泌体研究越来越多,研究者发现它普遍参与了机体免疫应答、抗原呈递、细胞分化、一些病症生长于侵袭等各种生物过程中。根据外泌体表面的特异生物化学特性通过提取试剂的特异配方把外泌体从水相中沉降下来。昆明正规外泌体提取试剂价格
外泌体RNA促进一些病症生长和转移:研究发现exosomes参与了一个很特别的一些病症发展机制:在大部分一些病症样本中,是不存在细菌传染的;但携带抗细菌信号(ISG,干扰素刺激基因)的一些病症侵袭性会更强,比如三阴性乳腺病侵袭性的病例。一些病症细胞是如何让正常细胞作出抗细菌反应的呢?研究表明,一些病症细胞刺激成纤维细胞,让它释放含有末端暴露的RN7SL1(这种RNA很类似细菌RNA)的exosomes,受体细胞吸收这种exosomes后,会误以为受到了细菌传染,正常的炎症应答就会因此被扰乱,exosomes中末端暴露的RN7SL1则作为DAMP信号启动乳腺病的RIG-I,较终达到促进一些病症生长以及耐药的目的。这项研究结果更重要的意义在于,表明一些病症患者血清分泌的exosomes中的RN7SL1有望作为炎症和不良预后的biomarker,甚至是治病靶点。同时,也启示exosomes研究者,除了小RNA,exosomes中其他类型的RNA一样具有潜在的研究意义。唐山正规外泌体提取试剂直销价离心除去细胞器,留取上清。
首先在无菌条件下提取人体体液,并用PBS缓冲液进行稀释,然后通过离心筛选初步去除体液中的细胞成分和细胞碎片,制成体液样本备用;体液样本纯化:通过过滤膜对上述体液样本进行过滤,进一步去除体液中的细胞残片及其他杂质,静置10~15分钟,留取沉淀物备用;外泌体提取:将上述沉淀物用PBS缓冲液进行悬浮,使外泌体悬浮于液体上层,然后用无菌针管吸取上层含有外泌体的液体,置于80℃储存备用。此提取方法条件复杂,成本高,专利申请利用静置不太可能把外泌体沉降下来;根据外泌体表面的特异生物化学特性通过提取试剂的特异配方把外泌体从水相中沉降下来。
外泌体相关miRNA与肺病的诊断:进一步研究发现,另外6种外泌体(miR-151a-5p、-30a-3p、-200b-5p、-629、-100、-154-3p)可用于肺病的诊断,其AUC为0.76。这些miRNAs具有NSCLC早期诊断的高度敏感性,有望成为NSCLC早期诊断筛查的生物标志物。在临床应用方面,目前ExosomeDiagnostics公司研发的基于血浆外泌体的ALK试剂盒已于2016年初被美国FDA批准用于临床。这是世界上个以血液样本分析外泌体RNA的临床液体活检。这项方法可以准确、实时地检测NSCLC患者的EML4-ALK突变,通过比较NSCLC患者组织ALK水平和相应的血浆样本发现该项检测可以达到88%的诊断灵敏度和100%的诊断特异性。而此前,对于EML4-ALK的检测是基于组织活检的FISH或IHC,而且,FISH缺乏灵敏性,误诊率也较高。外泌体在免疫中抗原呈递、一些病症的生长与迁移、组织损伤的修复等生理病理上起着重要的作用。
外泌体研究的主要应用:外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型,其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、一些病症侵袭等方方面面。有研究表明一些病症来源的外泌体参与到一些病症细胞与基底细胞的遗传信息的交换,从而导致大量新生血管的生成,促进了一些病症的生长与侵袭。一些病症。一些病症转移。来自白血病干细胞的外泌体促进急性骨髓性白血病(AML)细胞的增殖、迁移和压制细胞凋亡。治病靶标。利用外泌体递送小干扰RNA来沉默KRASG12D,从而特异性高效靶向至胰腺病细胞,以明显降低RAS活化、病细胞增殖和转移过程。免疫。β细胞将含有蛋白质和miRNA的外泌体释放到细胞外,并可转移到其他代谢部位或免疫内皮细胞,有利于维持葡萄糖体内平衡或造成胰岛素抵抗。心血管。外泌体介导miR-155从平滑肌细胞转移到内皮细胞导致了内皮细胞的损伤促进动脉硬化。分子标记。疾病诊断。在酒精性肝病、NASH、细菌性肝炎、药物性肝损伤和肝细胞病中发现循环EVs的水平上升。预后标志。不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能,可作为疾病诊断的生物标志物。天津正规外泌体提取试剂产品介绍
外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响,不利于下游实验,难以普遍普及。昆明正规外泌体提取试剂价格
外泌体在肺病治病中的作用:目前外科手术仍是肺病治病的较有效方法,但术后复发率很高,而传统放化疗对肺病的治病效果又极其有限。因此,肺病治病的新模式受到广大研究者的关注,已有大量研究证明外泌体在肺病治病中有广阔的应用前景。外泌体作为细胞间通讯的一种形式,在肺病的进程中具有重要作用,因此,控制外泌体的分泌可能成为治病肺病的潜在靶点。据相关报道称,EPI64可以通过启动特异的***和Rab27A来控制A549肺病细胞的外泌体分泌,提示EPI64可以作为治病的潜在靶点。此外,CD9、CD63、HSP90和HSP70在外泌体中富集,从而上调主要组织相容性复合物Ⅱ类分子表达水平,显着促进CD4+T细胞的增殖,通过免疫途径压制一些病症。理论上,所有促进肺病细胞分泌外泌体的机制都可以被用来作为肺病治病的潜在靶点,但目前关于其可行性的研究还比较少。昆明正规外泌体提取试剂价格
具体步骤是:以下所有步骤都在4℃下进行,1、300×g10min,弃沉淀,去除细胞2、2000×g20min,弃沉淀,去除死细胞3、10,000×g30min,弃沉淀,去除细胞碎片等亚细胞成分4、10,000×g70min,弃上清,沉淀即为外泌体5、PBS(每10ml细胞培养液用30mlPBS重悬)清洗沉淀物,混匀,10,000×g70min6、lmlPBS溶解沉淀(外泌体),立即使用或置于-80℃备用。7、一般超速离心法会结合密度梯度离心,这样得到的外泌体更纯,具体做法第4步后蔗糖梯度离心,10,000×g70min,以去除密度大于1.21g/ml的颗粒。优点是:成本低,操作简单,获得的囊泡...