细胞RNA提取的方法:实验提取步骤:标准Trizol提取步骤为 液氮研磨--加入Trizol裂解--加入氯仿抽提--离心--加入氯丙醇沉淀--离心--酒精洗涤--离心。将细胞培养皿置于冰上,加入Trizol裂解5-10分钟,用泵头轻轻吹打后吸取液体放入进口EP管中。加入1/5体积的氯仿,上下混匀液体,4度静置10-15分钟。(氯仿为有机溶剂,有效的使有机相和无机相迅速分离。有机相中主要是酚和蛋白结合,从而使得蛋白和RNA脱离,RNA进入水相)。4度离心15分钟,一定注意选择低温离心。离心后分成三层,RNA在上清里,从离心机轻轻拿出EP管,以免管内物质震荡导致下层沉淀激起。吸取上清的时候一定要动作轻柔,切忌吸取太多,一般吸到400-500ul,避免吸到下层沉淀,将液体置于新的EP管中。加入等体积异丙醇,4度静置10min,然后12000rpm离心10min。在实际RNA提取中,有几个提取原则:保证RNA一级结构的完整性。太原RNA提取试剂哪家便宜
酵母RNA的提取方法:浓盐法。酵母菌外层是厚达 1.2µm 的细胞壁,其化学成分 是葡聚糖(30-40%)和甘露聚糖(30%),此外,脂类8.5-13.5%,蛋白质 6-8%,还含有几丁质,酵母菌的葡聚糖,分子是为 240000 道尔顿,是一种分枝聚合物,葡聚糖与甘露糖之间由蛋白质维系起来。近 10% 的甘露聚糖的侧链通过磷酸二酯键与磷酸边接,所有这些连接方式都使得酵母提取物首要的也是关键的是如何破坏细胞壁。破壁方法有自溶破壁、酶法破壁等多种方法,而用高浓度盐溶液处理,同时加热,以改变细胞的通透性,就可以使核酸从细胞内释放出来。由于 RNA 钠盐易溶于水, 在含盐的菌体溶液中, RNA 有较高的溶解度, 这样, 通过控制温度使蛋白质变性沉淀,通过离心将 RNA 及蛋白质和脱核酵母菌体分离, 从而达到提取之目的。其中食盐起到自溶促进剂,以及防腐与脱臭的作用。天津RNA提取试剂哪家便宜总共可以使用该试剂盒进行50次标准提取。
RNA提取围绕DEPC的玄学。单纯高压过的蒸馏水或超纯水,基本可以视为无核酸酶活性等级的水。Thermo Fisher公司曾经做一项实验来说明这个问题。在PBS中加入不同浓度RNase A,高压或不高压,后溶解P-32标记RNA 探针。较后数据显示,除非原始的RNase A的浓度高达1 µg/ml,否则常规高压过的水,基本检测不出RNase A活性。当然,Thermo的科学家也很谨慎,说这个结论*适用于RNase A,不能推广到其他的RNase类型。不使用DEPC来处理RNA实验相关试剂和耗材,因为太费劲,而且DEPC还有毒性。相关的液体试剂,我会使用从公司购买的Nuclease-free的水来配制。没有很贵,一小瓶够用很久。很多时候买各种其他试剂,比如酶、siRNA等,也都会送这样的水。在耗材方面,直接使用大公司的离心管和吸头,根本不用担心核酸酶的问题。
RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和碱基构成。在细胞中,RNA种类繁多。根据结构功能的不同,RNA主要分三类,即tRNA、rRNA,以及mRNA。mRNA是依据DNA序列转录而成的蛋白质合成模板;tRNA是mRNA上遗传密码的识别者和氨基酸的转运者;rRNA是组成核糖体的部分,而核糖体是蛋白质合成的场所。细胞中还有许多种类和功能不一的小型RNA,像是组成剪接体(spliceosome)的snRNA,负责rRNA成型的snoRNA,以及参与RNAi作用的miRNA与siRNA等,可调节基因表达。根据它们在不同的PH值和不同极性溶剂的溶解度不同而使得分开。
RNA提取醇沉淀不是越多就越好。有些实验方案会推荐,在异丙醇沉淀后,用乙醇沉淀两次。实际上,任何提取实验,都会在纯度和得率这一对矛盾中取舍。醇沉淀会将脂溶性杂质去掉,但部分非脂溶性的杂质依然会连同RNA一起被沉淀下来。因此,多整几次,并不会让RNA的纯度翻倍,反而还会有降低得率的风险。一般情况下,异丙醇和乙醇各沉淀一次即可。但是,倘若预计RNA浓度很低,那就只能放弃纯度,在低温沉淀数小时,以换来较高的得率。围绕DEPC的玄学。许多实验方案会推荐使用0.1% DEPC处理RNA相关用水,以灭活RNase。这一点是要肯定的。不过,在使用DEPC的过程中,又充斥着一些玄学。高压灭菌后的DEPC水,会有一股“香甜”的味道。许多人会以为那是残留的DEPC而不敢用。实际上,这只是DEPC分解成CO2和乙醇后,产生的一些挥发性酯类副产物。专门的高盐缓冲系统允许RNA物质基团结合到旋转柱的玻璃纤维基质上,同时使污染物通过柱被有效地洗去。上海重庆RNA提取试剂
tRNA是mRNA上碱基序列(即遗传密码子)的识别者和氨基酸的转运者。太原RNA提取试剂哪家便宜
精细化学品行业的传统领域主要包括原代细胞,无血清细胞冻存液,干细胞无血清培养基,动物疾病模型等领域。经过长期积累,我国精细化工行业在传统领域已经基本满足了国民经济发展的需要,部分产品已具有一定的国际竞争力,染料、农药的产量已处于全球**,涂料产量已达到全球第四位。精细化工中间体产品**性强,需要建立特定销售渠道,能否与客户保持长期业务合作,将对生产型企业日常经营和长远发展构成重大影响。精细化工中间体的质量和纯度直接影响到终端产品的性能和品质。精细化工产品一般用于工业生产过程的特定领域或实现下游产品的特定功能,因此用户对产品的质量和稳定性要求较高,对销售企业甄选过程和标准较为严苛,一旦进入供应商名录将不会轻易更换。精细化学品所涉及的生产流程较长,要经过多个多单元操作,制造过程较为复杂,并在生产过程中满足温和的反应条件、安全的操作环境、特定的化学反应等条件,实现化学品易于分离、较高的产品收率,这就需要高水平的工艺技术和反应设备。因此,精细化工产品一般附加值较高。太原RNA提取试剂哪家便宜
植物RNA提取:植物组织中,富含酚类化合物,或富含多糖,或含有某些尚无法确定的次级代谢产物,或RNase的活性较高。这些物质在细胞裂解后与RNA紧密结合形成难溶复合物或者胶状沉淀,很难将其去除。所以我们在提取植物组织时,要选取针对植物的试剂盒,试剂盒里的裂解液能有效解决多酚易氧化、多糖化合物与核酸分离等难题。1、植物的果皮、果肉、种子、叶片等要在研钵中充分研磨,研磨过程中液氮要及时补充,避免样品融化,研磨后的样品应迅速加入裂解液中震荡混匀,避免RNA降解。2、像水稻及小麦叶片等富含纤维的样本,则应适当减少提取用量,否则组织研磨及裂解不彻底,会使提取的RNA产量较低。3、含水分较多的植物组织例如...