RNA充当遗传物质:其实RNA并不是只能干这些脏活累活,实际上,它也是可以充当遗传物质的。病菌的遗传物质大多都是RNA,比如,这次的病菌的遗传物质就是RNA。不过,如今具有细胞结构的生物,它们的遗传物质基本上都是DNA。而科学家认为,其实较早的生物,其实都是以RNA作为遗传物质的。这个假说也被叫做RNA世界假说。其实这个也很好理解,我们都知道RNA和DNA都有碱基,而且就是利用的碱基互补原则来完成任务的。DNA要完成生命活动就指导RNA。因此,只要RNA能够完成类似于DNA的自我复制,那么就可以作为遗传物质。马铃薯块茎,苹果,西瓜果肉,猕猴桃,梨,月季等,中快速提取总RNA,同时可以处理大量不同样品。南昌正规RNA提取试剂生产厂家
法尔和梅洛的发现。科学家在矮牵牛花实验中所观察到的奇怪现象,其实是因为生物体内某种特定基因“沉默”了。导致基因“沉默”的机制就是RNA干扰机制。此前,RNA分子只是被当作从DNA(脱氧核糖核酸)到蛋白质的“中间人”、将遗传信息从“蓝图”传到“工人”手中的“信使”。但法尔和梅洛的研究让人们认识到,RNA作用不可小视,它可以使特定基因开启、关闭、更活跃或更不活跃,从而影响生物的体型和发育等。诺贝尔奖评审会在评价法尔和梅洛的研究成果时说:“他们的发现能解释许多令人困惑、相互矛盾的实验观察结果,并揭示了控制遗传信息流动的自然机制。这开启了一个新的研究领域。”南昌正规RNA提取试剂生产厂家rRNA是组成核糖体的部分,而核糖体是蛋白质合成的场所。
RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和碱基构成。在细胞中,RNA种类繁多。根据结构功能的不同,RNA主要分三类,即tRNA、rRNA,以及mRNA。mRNA是依据DNA序列转录而成的蛋白质合成模板;tRNA是mRNA上遗传密码的识别者和氨基酸的转运者;rRNA是组成核糖体的部分,而核糖体是蛋白质合成的场所。细胞中还有许多种类和功能不一的小型RNA,像是组成剪接体(spliceosome)的snRNA,负责rRNA成型的snoRNA,以及参与RNAi作用的miRNA与siRNA等,可调节基因表达。
细胞RNA提取的方法:异丙醇主要用于沉淀RNA。取出EP管后可以见到侧壁沉淀,轻轻吸弃上清。向EP管中加入75%酒精洗涤沉淀,帮助分离剩余的有机试剂(剩余有机试剂过多会影响OD值和PCR反应),轻弹沉淀,使其浮在酒精,静置1-2min,让酒精充分接触沉淀,充分溶解有机试剂,然后4度离心5min。轻轻吸弃上清。将EP管再次放于离心机中瞬时离心,弃掉管壁残余液体。然后将EP管置于超净台中干燥5-10min.。注意RNA样品不要过于干燥,否则很难溶解。加入50ul DEPC处理水,震荡充分溶解沉淀。测量RNA浓度。将RNA保存于-80度。一个核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和碱基构成。
酵母RNA的提取方法:浓盐法。酵母菌外层是厚达 1.2µm 的细胞壁,其化学成分 是葡聚糖(30-40%)和甘露聚糖(30%),此外,脂类8.5-13.5%,蛋白质 6-8%,还含有几丁质,酵母菌的葡聚糖,分子是为 240000 道尔顿,是一种分枝聚合物,葡聚糖与甘露糖之间由蛋白质维系起来。近 10% 的甘露聚糖的侧链通过磷酸二酯键与磷酸边接,所有这些连接方式都使得酵母提取物首要的也是关键的是如何破坏细胞壁。破壁方法有自溶破壁、酶法破壁等多种方法,而用高浓度盐溶液处理,同时加热,以改变细胞的通透性,就可以使核酸从细胞内释放出来。由于 RNA 钠盐易溶于水, 在含盐的菌体溶液中, RNA 有较高的溶解度, 这样, 通过控制温度使蛋白质变性沉淀,通过离心将 RNA 及蛋白质和脱核酵母菌体分离, 从而达到提取之目的。其中食盐起到自溶促进剂,以及防腐与脱臭的作用。排除其它核酸分子(DNA)的污染。金华RNA提取试剂哪里买
常用RNA提取方法有:1TRIzol法;2TRIzol+过柱法;3CTAB+过柱法;4试剂盒法。南昌正规RNA提取试剂生产厂家
RNA提取围绕DEPC的玄学。单纯高压过的蒸馏水或超纯水,基本可以视为无核酸酶活性等级的水。Thermo Fisher公司曾经做一项实验来说明这个问题。在PBS中加入不同浓度RNase A,高压或不高压,后溶解P-32标记RNA 探针。较后数据显示,除非原始的RNase A的浓度高达1 µg/ml,否则常规高压过的水,基本检测不出RNase A活性。当然,Thermo的科学家也很谨慎,说这个结论*适用于RNase A,不能推广到其他的RNase类型。不使用DEPC来处理RNA实验相关试剂和耗材,因为太费劲,而且DEPC还有毒性。相关的液体试剂,我会使用从公司购买的Nuclease-free的水来配制。没有很贵,一小瓶够用很久。很多时候买各种其他试剂,比如酶、siRNA等,也都会送这样的水。在耗材方面,直接使用大公司的离心管和吸头,根本不用担心核酸酶的问题。南昌正规RNA提取试剂生产厂家
植物RNA提取:植物组织中,富含酚类化合物,或富含多糖,或含有某些尚无法确定的次级代谢产物,或RNase的活性较高。这些物质在细胞裂解后与RNA紧密结合形成难溶复合物或者胶状沉淀,很难将其去除。所以我们在提取植物组织时,要选取针对植物的试剂盒,试剂盒里的裂解液能有效解决多酚易氧化、多糖化合物与核酸分离等难题。1、植物的果皮、果肉、种子、叶片等要在研钵中充分研磨,研磨过程中液氮要及时补充,避免样品融化,研磨后的样品应迅速加入裂解液中震荡混匀,避免RNA降解。2、像水稻及小麦叶片等富含纤维的样本,则应适当减少提取用量,否则组织研磨及裂解不彻底,会使提取的RNA产量较低。3、含水分较多的植物组织例如...