RNA的提取:众所周知,Trizol是一种RNA提取试剂,内含异硫氰酸胍和酚等物质,能迅速破碎细胞和溶解细胞中的其他成分,压制细胞释放出核酸酶,维持细胞中RNA的稳定性,我们可以在反应物中加入Trizol后摇匀,在加入氯仿离心,这样的话我们的RNA就进入了水相中,再用异丙醇沉淀水相中的RNA,即可达到提取总RNA的目的了。首先我们需要称取一定量的预处理好的废酵母配10%左右的酵母溶液,在一定温度下,加入一定浓度的氯化钠,之后加入NaOH溶液调节反应的pH,搅拌抽提一定时间后,离心分离上清液,调节pH至等电点,经酒精沉淀获得核糖核酸,用水定容至100mL取1m适当稀释,调pH7.0,这样的话RNA就出现了,分别测定吸光值A260和A280并计算A260/A280,就可以测定RNA的提取率了。当然啦,我们还可以进行深入研究,如测定Nacl的浓度,PH的大小,以及抽提时间对RNA提取率的影响啦。马铃薯块茎,苹果,西瓜果肉,猕猴桃,梨,月季等,中快速提取总RNA,同时可以处理大量不同样品。南京珠海RNA提取试剂
Trizol法是一种新型总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞,压制细胞释放出的核酸酶。虽然Trizol里面含有RNA酶压制剂的,1ml的Trizol一般较多只能裂解100mg的组织。但是如果组织过量,Trizol无法完全浸润组织无法完全裂解组织,多余组织内的RNA酶等物质会导致RNA的降解。这是RNA降解的很重要的原因。同时,由于RNA容易降解,在实验过程中一般都要求口罩的,避免组织的污染。同时选用的无RNA酶的进口泵头、EP管以及DEPC水,在提取过程中,一定要时刻提醒自已RNase Free-RNase Free-RNase Free,实验就成功一半啦~石家庄正规RNA提取试剂单价使用时一定要根据自己的实验需要购买**提取试剂盒, 如果不是**试剂盒。
RNA提取注意事项:使用时一定要根据自己的实验需要购买**提取试剂盒, 如果不是**试剂盒,或许能提出RNA,但不能确保其质量以及完整性,会影响RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析、分子克隆等后续实验的结果。当前提取效果好的是RNA提取试剂盒,但其售价较高,单次实验费用花费太大,对精度要求不高的实验没有必要购买,当然还有其它的进口试剂盒,但是均存在价格高、订货周期长的问题(如果碰上国内无货的时候,要从国外发货,会等很长一段时间)。普通的提取实验用国产的试剂盒就足以,价格不高,基本上各地均有现货(国内生产的试剂盒中销售面比较广的一种)等,其价格比进口试剂盒要便宜许多,且效果还不错,性价比还可以。
法尔和梅洛的发现。科学家在矮牵牛花实验中所观察到的奇怪现象,其实是因为生物体内某种特定基因“沉默”了。导致基因“沉默”的机制就是RNA干扰机制。此前,RNA分子只是被当作从DNA(脱氧核糖核酸)到蛋白质的“中间人”、将遗传信息从“蓝图”传到“工人”手中的“信使”。但法尔和梅洛的研究让人们认识到,RNA作用不可小视,它可以使特定基因开启、关闭、更活跃或更不活跃,从而影响生物的体型和发育等。诺贝尔奖评审会在评价法尔和梅洛的研究成果时说:“他们的发现能解释许多令人困惑、相互矛盾的实验观察结果,并揭示了控制遗传信息流动的自然机制。这开启了一个新的研究领域。”常用RNA提取方法有:1TRIzol法;2TRIzol+过柱法;3CTAB+过柱法;4试剂盒法。
与DNA不同,RNA一般为单链长分子,很多RNA也需要通过碱基配对原则形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学功能。RNA是以DNA的一条链为模板,以碱基互补配对原则,转录而形成的一条单链,主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达,是遗传信息向表型转化过程中的桥梁。在此过程中,转运RNA是携带与三联体密码子对应的氨基酸残基与正在进行翻译的mRNA结合,而后核糖体RNA将各个氨基酸残基通过肽键连接成肽链进而构成蛋白质分子。有些生物,例如一些病菌,也直接使用RNA作为遗传信息的载体,而不是DNA。β-巯基乙醇主要破坏RNase蛋白质中的二硫键。济南RNA提取试剂生产厂家
RNA定量方法与DNA定量相似。南京珠海RNA提取试剂
Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,采用变性剂即内含异硫氰酸胍酚和β-巯基乙醇等变性物质,能迅速破碎细胞,压制细胞释放出的核酸酶。异硫氰酸胍属于解偶剂,是一类强力的蛋白质变性剂,可溶解蛋白质,并使蛋白质二级结构消失,细胞结构降解,**白迅速与核酸分离。β-巯基乙醇主要破坏RNase蛋白质中的二硫键。细胞裂解后,细胞释放出蛋白质、DNA、RNA等物质,再根据它们在不同的PH值和不同极性溶剂的溶解度不同而使得分开。RNA的定量计算1.RNA定量方法与DNA定量相似。RNA在260nm波长处有较大的吸收峰。因此,可以用260nm波长分光测定RNA浓度,OD值为1相当于大约40μg/ml的单链RNA。如用1cm光径,用 ddH2O稀释DNA样品n倍并以ddH2O为空白对照,根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度:RNA(mg/ml)=40×OD260读数×稀释倍数(n)/1000。2. RNA纯品的OD260/OD280的比值为2.0,故根据OD260/OD280的比值可以估计RNA的纯度。若比值较低,说明有残余蛋白质存在;比值太高,则提示RNA有降解。南京珠海RNA提取试剂
拭子RNA提取试剂的选择?1、产品价格。价格也是选购产品的重要考量因素。对于绝大多数实验如Northern杂交、RT-PCR、RealTimeRT-PCR、cDNA文库构建等,国产试剂盒都能满足质量要求。与国外有名品牌相比,国产试剂盒的价格较为便宜,价格还不到国外品牌价格的30%,性价比较高。因而,对于以上实验建议选用国产试剂盒。一些经费不是很多的课题研究或样本量较大的临床检测项目,特别适合选用国产试剂盒。2、与国外有名品牌相比,国产试剂盒在拭子RNA提取纯度上略有不足,但不影响大多数实验,特别是下游需要PCR扩增的实验和分子杂交类实验。在提取得率上,国内试剂盒与国外品牌差别不大,而在价格方面...