实验简介: 药物研究包括吸收、分配、代谢、排泄和毒性等多个方面,而吸收是第一步。这个实验在以内皮细胞通透性、药物渗透等为研究方向的课题中很常用。 常见检测细胞: 人结肠腺*细胞系 Caco-2、HT-29、Lovo、SW-480,人结肠上皮细胞 T84,狗肾上皮细胞系 MDCK,猪肾上皮细胞系LLC/PK1 等,主要模型为上皮细胞吸收、血脑屏障。 具体操作: 上皮细胞生长到细胞汇合度达80-90%时开始实验,不要超过90%,否则会影响到后续细胞单层的形成。将细胞均匀接种在小室膜上。对于24孔板和96孔板的接种密度见本文图示。细胞检测试剂盒上海授权代理商。干细胞培养细胞培养联系方式
取上述200μL细胞液加入小室,下室(培养板)加入900L含有10% FBS的培养基。不同规格的小室和培养板所加的体积不同,具体参考Millicell®产品说明书。37°C孵育24至72小时,依据**细胞类型而定。孵育结束,小心取出细胞小室,吸掉小室上层培养液,PBS清洗一遍,70%酒精或者4%多聚甲醛固定5min,0.5%结晶紫(2%乙醇或PBS溶解)染色20min,然后进行第8步或者第9步。PBS清洗两次以去除多余的染料,立即用棉签擦去滤膜上层的细胞,自然静置风干。显微镜下观察滤膜下层的细胞,随机选取不同的视野计数并算平均值。结晶紫溶解滤膜下层细胞,然后用33%醋酸脱色,将结晶紫完全洗脱下来,洗脱液可在酶标仪上570nm读取OD值。这种方法可以避免视野下细胞穿透不均匀带来的误差。黄浦区细胞转染细胞培养哪家优惠益启生物的细胞培养怎么样?
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