糖类染色实验——糖原染色:高碘酸氧化液:高碘酸 0.5 g,蒸馏水 100 ml。此液溶解后放入冰箱中待用。Schiff 染色液:碱性复红 1 g,1mol/L 盐酸 20 ml,焦亚硫酸钠(偏重亚硫酸钠)2 g,双重蒸馏水 200 ml。先将 200 ml 双重蒸馏水煮沸,稍有火焰,加入 1 g 碱性复红,再煮沸 1 min,冷却至 50℃ 加入 20 ml1mol/L 盐酸,待 35℃ 时加入 2 g 焦亚硫酸钠。室温中 2 h 之后见稍带红色,5 h 之后变为无色液体。棕色瓶内装好,放入冰箱中保存待用。1. 石蜡组织切片,常规脱蜡至水。2. 蒸馏水洗 2 次。3. 高碘酸氧化液处理 10~20 min。4. 充分蒸馏水洗。5. Shciff 液染色,染色 10~20 min(如果室温在 15℃ 以下时,可在湿盒内加入温水而加快反应)。6. 流水冲洗 3 min(对于着色较深的切片可适当缩短时间)。7. 用 Mayer 明矾-苏木**染细胞核 3~5 min。8. 0.5% 盐酸乙醇液分化 30s,自来水浸洗 2 min。遇醋酸发生沉淀,胃粘蛋白则除外。山东糖原染色试剂盒

糖原染色在使用过程中需要注意以下几个方面:尽可能选取小块新鲜组织及时固定。糖原易溶于水,在酶的作用下很容易分解葡萄糖,更易溶于水,固定之前决不能用水或生理盐水等浸洗。应避免用水溶性固定液,宜采用酒精性固定液,如Carnoy液,能较好地保存糖原,但有使糖原流动到细胞一侧的现象,多数人认为是由于固定剂把细胞内的糖原推向固定剂对组织浸透的方向而造成。其他组织应用中性福尔马林固定为佳。组织在4℃左右温度内固定与保存,是针对糖的性质和避免糖原溶于水而采取的相应措施。乙醇能沉淀白蛋白、球蛋白,亦能**白和糖原沉淀,但仍可溶于水,因此较好不单独使用乙醇固定,以乙醇为溶剂的混合固定液固定为佳。上海口碑好的糖原染色试剂盒自早幼粒阶段以后的粒细胞和幼单核细胞可呈弱阳性反应。

糖原D-PAS染色液:使用方法:1、两张相同切片,二甲苯脱蜡,梯度乙醇入水。2、一张切片入37℃淀粉酶溶液处理1h。另一张不用淀粉酶溶液处理,入水中1h作为对照。3、流水冲洗两张切片各5~10min。4、入过碘酸溶液,室温放置5~8min,一般不宜超过10min。5、自来水冲洗1次,再用蒸馏水浸洗2次。6、入Schiff Reagent,置于室温阴暗处浸染10~20min。7、自来水冲洗10min。8、入Mayer苏木素染色液,染细胞核1~2min。9、(可选)酸性乙醇分化液分化2~5s。10、自来水冲洗10~15min,更换蒸馏水清洗使其返蓝。11、二甲苯透明,中性树胶封固。
特殊染色化学试剂的选择:化学试剂的选择主要针对自配试剂而言,对于商品化试剂盒则在于染液质量。1、一般要求选用很好品牌的化学试剂,特别是一些染色中关键的试剂。很好的化学试剂(如Sigma、国药、阿拉丁、西陇等)是保证高质量染液的前提和关键,特别对于染液中的关键试剂尤为重要。如碱性品红在一些染色液(抗酸、无色品红、醛品红等)中均为主要试剂,其质量决定了较终的染色效果。如配制无色品红染液时,所使用的偏重亚硫酸钠试剂质量不合格,则会导致染液配制失败,无法染出合格的切片。2、纯度一般以分析纯为主。动物材料取用时需对动物施以麻醉,常用的麻醉剂有氯仿和。

糖原染色临床意义:1、急性淋巴细胞白血病、淋巴组织恶性增生性疾病、红白血病、戈谢病的原始细胞呈强阳性反应或阳性反应;缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍、骨髓增生异常综合征亦可呈阳性反应;急性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、良性淋巴细胞增多症、尼曼-皮克细胞呈阴性反应或弱阳性反应。巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、再生障碍性贫血等,幼红细胞为阴性反应。偶有个别幼红细胞呈阳性反应。2、帮助鉴别不典型巨核细胞和霍奇金细胞,巨核细胞呈强阳性反应;霍奇金细胞呈弱阳性或阴性反应。3、帮助鉴别白血病细胞和腺骨髓转移的腺细胞,腺细胞呈阳性反应。切取材料时刀要锐利,避免因挤压细胞使其受到损伤。上海口碑好的糖原染色试剂盒
糖原的固定要及时,而且标本要新鲜。山东糖原染色试剂盒
糖原染色:方法固定液Carnoy固定液:纯酒精60 ml 冰醋酸10ml氯仿 30ml,也可以选用75%酒精配制1) 过碘酸酒清夜配法: 过碘酸(HIO .2H O) 0.4g 95%酒精 35ml M/5醋酸钠(2.72g+蒸馏水100ml) 5ml蒸馏水10ml 保存于冰箱内,用棕色瓶,可用两周.2)Schiff氏液: 0.5克碱性品红加入100毫升蒸馏水中,时时摇动三角瓶5分钟,使之充分溶解.冷却至50℃后过滤加入10毫升1N盐酸.冷却至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸钠,在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存.3)Schiff氏酒**配置 Schiff氏液 11.5ml1NHCI 0.5ml纯酒精 23ml4)亚硫酸水 1%偏重亚硫酸蒸馏水180ml的树胶溶解。山东糖原染色试剂盒
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糖原及粘液染色法:操作方法:(1)石蜡切片脱蜡至水。(2)0.5%过碘酸水溶液5分钟。或1%过碘酸95%酒精溶液(过碘酸再结晶应重新配制使用)。(3)蒸馏水洗,70%酒精洗。(4)Schiff氏液15-30分钟。(Schiff氏液从冰箱取出升至室温使用)(5)流水冲洗10分钟。(6)苏木素浸染细胞核2-3分钟。(7)脱水、透明、封盖。结果:糖原呈红色,细胞核呈蓝色。试剂配制:(1)0.5%过碘酸(HIO4)水溶液或70%酒精溶液。(2)Schiff氏试剂。碱性品红1g蒸馏水200ml1N盐酸(98.3ml比重1.16盐酸,加入蒸馏水成1000ml)20ml偏重亚硫酸钠或钾1g碱性品红1g加入2...