每隔2天用电阻仪测量细胞跨膜电阻值,直到达到平台,提示细胞已经形成致密单层;或者通过检测荧光染料荧光黄的通过率,以判断细胞刚好完全汇合。电阻仪测量因不伤害细胞,可以继续培养而比荧光黄法更为普遍地被采用。细胞单层汇合后,用DPBS清洗一次细胞,加入含有不同浓度药物(一般10-200μM)的缓冲液。如果要测药物从上至下的运输效果,则上层小室中加药物,下层培养板孔里只加缓冲液;反之则相反。将培养板在37℃条件下培养(60rpm震荡或者不震荡)1-2h,到达时间之后,分别从细胞小室和培养孔里取出一定
体积缓冲液(一般50μL )转移至新的转运分析板进行LC/MC分析。对于放射性标记药物,分别取出20μL缓冲液加入100μL闪烁液,通过多孔闪烁读板仪读值。 上海益启生物的联系电话。松江区血清细胞培养代理价
c ) 用无血清的冷培养基稀释ECM 胶至2 0 µ g/mL ,以5-10µg/cm2的密度加入到细胞小室的上层(按照ECM产品说明书的推荐比例和体积),轻轻摇晃使胶均匀铺在膜上。以上操
作在冰上进行。
d)立即将铺好ECM胶的细胞小室置于培养板中,于37°C孵育1小时,ECM胶可由液体凝成固体,吸走多余的或者未凝的胶。细胞用PBS清洗一次,EDTA或者0.05%胰酶消化,然后用包含5%BSA的无血清培养基中和,1500rpm离心5-10min。用无血清培养基重悬细胞,调整细胞密度至0.5-2.0x106cell/ml。 虹口区培养小室细胞培养代理价格上海益启生物干细胞培养订购方便。
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