对于探索性研究，Western blotting仍是优先平台，是用于评估新抗体和其它蛋白检测分析
法（如ELISA、基于微珠的分析法、流式细胞术和免疫组织化学）的标准。新技术的开发**减少Western blotting过程需要的时间（例如默克密理博的 SNAP i.d.® 2.0系统，目录编
号SNAP2MM），提高了WB实验的效率。
Western blotting的基本程序涉及下述关键步骤
样本制备
凝胶电泳
转膜
封闭非特异性结合
加入抗体
检测
Western Blot 实验流程图
Troubleshooting
问题 可能的原因 处理方法
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前言
流式细脆术是具有很强统计学功能的技接术，它根据物理特征和焚光信号对悬浮细胞群进行鉴定和分选。在50年前就已经开发了流式细胞分析仪;直至1960年代晚期，这种技术才开始商业化。
流式细胞术定义为在悬浮液中，当粒子（如细胞）通过激光或其它光源时，测量细胞和荧光特性。
根据这些检测，可以对它们之中的特定群体和亚群进行鉴定，甚至可以通过细胞分选进行物理分离;在细胞分选中，根据荧光特征使细胞带电从而发生静电偏移。也可以分析粘附细胞和因体组织，前提是要对它们进行解离，建立单细胞悬浮液。
流式细胞术依赖于悬浮细胞的流体动力学，建立在激光器前通过的单细脆流。通过细胞散射光方式的不同，在千粒子/秒的速度下测定细胞的大小和细胞内的复杂性。然后
把这些拟合数据转化为可定量的和可用于二维（或三维）图像的致据。 H3抗体抗体报价益启生物公司带您了解抗体详情。
关于抗体质量
抗体的质量决定了整个免疫检测的成败，
是在选择抗体时优先的考虑因素。
通常认为，特异性决定抗体功能，所以抗体必须拥有高质量，尤其是商业化的抗体。然而出人意料的是，通常情况并非如此。尽管理论上确实可以模拟和预测抗体结合的特异性，但是数十年的使用经验证明，一些因素如免疫原的抗原性和***性、抗体浓度、缓冲液、免疫作用和样品制备等因素都会对交叉反应和非特异性结合起到***的促进作用。
自70年代以来，当研究人员开始将抗体用作蛋白探针时，抗体性能不一致的问题一直困扰着他们。
问题 可能的原因 处理方法
印迹上出现条纹 在凝胶的蛋白负荷过量。 准确测量蛋白浓度，载入较少的蛋白。
印迹有污染或模糊 凝胶平衡不当，或在实验过程中收缩 检查凝胶平衡时间。
采用丽春红S染色时， 转膜无效 转膜时，小心除去气泡。
印迹染色较差 确保在电转过程中因为温度过高而产生气泡或凝胶/膜变形
采用丽春红S染色时， 在转膜过程中蛋白没有转移 检查设备（转膜盒、盒盖、电源）。
印迹没有染色 检查在转膜过程中凝胶和膜的顺序是 确保膜位于凝胶的右侧。
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Troubleshooting
问题
微珠计数不足
本底过高
微珠不在制定的区域内或圈门中
整个微孔板的信号与本底相同
阳性对照的信号任样品信号过高或饱和
样品信号过低
样品和/或标准品CV值较大
微孔板洗板机吸液高度设置过低微珠混合物配制不当
样品颗粒物或粘度引起干扰
没有正确调整探针高度
本底孔受污染
洗涤不充分
Luminex*器没有正确校准或近期没有校准
没有正确词整门设置
微珠区域设置错误所用样品类型不正确*器没有洗涤或primed
做珠暴露于光下检测不正确或检测不到未加入抗体 Upstate抗体哪家靠谱？奉贤区Upstate抗体抗体哪家优惠
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随着药物研发和蛋白研究水平的快速增长，人们希望能在有限的样本中快速获得和分析大量数据用于疾病早期诊断，个性化***及药物开发等多个方面。而采用传统的“单重”蛋白检测法，如ELISA或蛋白免疫印迹分析法，获得这些信息越来越困难、不实际或受成本限制。因为多因子检测法允许在单独一份复杂和非均质样品中检测多重分析物，所以当分析血清、脑脊液、腺体分泌物或其它生理样品时，经证实这种方法是特别有效的。多重蛋白检测的方法常以双抗夹心法为基础，或固定在芯片上作为“平面阵列”或结合于微珠作为“悬浮阵列”。黄浦区Calbiochem抗体抗体联系方式
