对于探索性研究，Western blotting仍是优先平台，是用于评估新抗体和其它蛋白检测分析
法（如ELISA、基于微珠的分析法、流式细胞术和免疫组织化学）的标准。新技术的开发**减少Western blotting过程需要的时间（例如默克密理博的 SNAP i.d.® 2.0系统，目录编
号SNAP2MM），提高了WB实验的效率。
Western blotting的基本程序涉及下述关键步骤
样本制备
凝胶电泳
转膜
封闭非特异性结合
加入抗体
检测
Western Blot 实验流程图
Troubleshooting
问题 可能的原因 处理方法
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· 间接检测法
在间接检测法中，用纯化抗体进行解育和目标抗原结合，随后采用荧光标记二抗，形成一抗-焚光二抗复合物，从而实现对目标抗原的检测。·生物素化检测法
第三种方法即生物素化检测法;亲和素是细菌源蛋白，由于它们与生物素的天然亲和力，故如此命名。生物素-镇需亲和素复合物有时叫做molecular velcro"，因其作为一种结合两种分子的研究工具已***用于免疫检测、蛋白组学、亲和纯化以及核酸-蛋白相互作用的分析中。市场上有多种生物素化一抗或二抗可供选择;通过随后对荧光基团结合链霉亲和素的解育进行流式细胞检测。可能会实现信号放大，因为生物素具有四个链霉亲和素结合位点，导致荧光信号可能增加四倍。 Abcam抗体抗体代理价格MYC抗体的报价具体是多少呢?
抗体和流式细胞术
虽然细脆群可以采用光散射性质进行大致鉴定，但细胞亚群的更准确鉴别需要有细胞亚型特异性表面或胞内分子结合探针。例如，外周血样品中的所有淋巴细胞可能具有相同的尺寸和胞内复杂性。可将细胞表面受体（例如CD4、CD8和CD19）特异性荧光结合抗体应用于细胞悬浮液，以鉴别辅助T细胞、细胞毒性T细胞以及B细胞。**基本的单激光流式细胞分析仪也配备了足够的过滤器，以便可以同时检测四个荧光基团;目前，在单验一项实验中，可以区分多达18个波长的荧光。获取来自于这些复杂荧光基团的信号需要有多个激光器、适当的过滤器和抗体上标记荧光的选择，因为物种间交叉反应性和二抗与非特异性靶标的结合，容易干扰数据结果。
如果实验试剂将用于进一步测量，应避免直接使用移液管从试剂瓶中移取。（氧化活性污采物可通过非特异性显色影响费底物），检查所用抗体和陶结合物的实验验稀释度
检查确保样品根据建议的样品操作抽提、配制和贮菱（聚丙烯试管，澄清样品的贮载温度为-20℃）。配置样品和标准 品时究分程匀检查您的移液器，必要时进行校准。在每次移液器移取后更换移液器吸头。加样后，充分震荡微孔板，使试剂混匀
检查自动微孔板洗板机能正常工作;在每个洗涤步骤后，必须完全除去残留液体。 神经抗体的报价具体是多少呢?
问题 可能的原因 处理方法
印迹上出现条纹 在凝胶的蛋白负荷过量。 准确测量蛋白浓度，载入较少的蛋白。
印迹有污染或模糊 凝胶平衡不当，或在实验过程中收缩 检查凝胶平衡时间。
采用丽春红S染色时， 转膜无效 转膜时，小心除去气泡。
印迹染色较差 确保在电转过程中因为温度过高而产生气泡或凝胶/膜变形
采用丽春红S染色时， 在转膜过程中蛋白没有转移 检查设备（转膜盒、盒盖、电源）。
印迹没有染色 检查在转膜过程中凝胶和膜的顺序是 确保膜位于凝胶的右侧。
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对于单克隆抗体，我们采用的是机器人克隆和筛选系统，该系统可以处理所有杂交瘤的融合和培养。这种高度自动化的流程使用了前列技术，确保达到比较大产量和比较好的一致性。我们通过阵列射流自动化微阵列系统检测融合情况，鉴别阳性克隆，然后用ELISA和Western blot进行再筛查。***，对阳性克隆多次稀释，以分离出比较高质量的产物，直至样本达到**克隆性。这一附加的程序正是默克密理博抗体质量优于竞争对手的原因之一。
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