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dPCR的基本原理

       目前dPCR主要有两种形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。可以使用几种不同的方法来分配样品，包括微孔板，毛细管，油乳剂和带有核酸结合表面的小型化腔室阵列。样品的分配使人们可以通过假设分子种群遵循泊松分布来估计不同分子的数量，根据泊松分布的原理，反应体系中目标分子的拷贝数可以通过公式A=-ln[(N-X)/N]*N计算，从而解决了多个目标分子存在于单个液滴中的可能性。 流式检测，顺序逐一检测每个微滴，无荧光交叉干扰，微滴阴性阳性判读准确。上海国产数字PCR正规代理

       数字PCR为juedui定量，qPCR为相对定量，数字PCR较qPCR更精细、更灵敏。所以说，未来数字PCR将成为qPCR的重要补充，在部分领域逐步替代荧光定量PCR。

未来这些领域将广泛应用到数字PCR：

科研：高校（生命科学学院、环境学院、医学院、药学院）等。

医院：病理科、血液科、妇产科、心血管科、检验科、转化医学中心

：研究院单位、疾控中心、海关（出入境检验检疫）、质监局、环境/环保局等。

企业：第三方检测机构、IVD(分子体外诊断试剂)、生物制药等。 无锡广东数字PCR正规代理关于甲基化含量的鉴定。

       同时，从公式也可以看出，随着反应阳性体系数（X）的增加，体系中目标分子的拷贝数相对于X会有较大的差距，随着X的持续增加，数字PCR结果的不确定度也随着提高，总体来说，数字PCR阳性体系的数量不得超过总体系数量的80%。另一个方面，N的增加会使整个数字PCR体系具有较大的线性范围，并可以提高反应的灵敏度、稳定性以及可重复性。因此，目前dPCR都需要在成本可控的情况下，增加分配的腔室数和液滴数。

商业化dPCR平台及其特点

       发展到现在，市面上常见的dPCR主要有两种：微滴式dPCR（droplet dPCR，ddPCR）和芯片式dPCR（chip dPCR，cdPCR）技术。由于芯片式dPCR制造芯片的成本较高，目前微滴式dPCR正越来越受到企业的认可。

二代测序辅助建库

       目前靶向测序建库方法包括扩增子方法，在均相溶液中，当扩增引物增加时，由于扩增引物之间的相互作用，从而影响扩增的效率;如果将其分散到大量微液滴中扩增，将可降低引物间相互作用，提高扩增效率。同时还可以实现对于少量模板的有效扩增，得到更多的有效测序数据。

CRISPR-Cas9基因编辑结果验证

       CRISPR-Cas9技术的发明，是基因编辑技术的一大突破，但如何验证实验是否成功，仍需要高灵敏度的检测方法，数字PCR技术可以满足这一需求。Broad研究所张锋团队发明了以CRISPR为基础的SHERLOCK技术可以对核酸进行高灵敏度的定性检测，但精确定量评估时仍采取了数字PCR进行确认。 2个光电倍增管（PMT），灵敏度及增益优于MPCC或CCD。

MicroDrop-100系统产品特点

一、适应性广，灵活性高

1、理论上可覆盖qPCR（荧光定量PCR)的所有应用

2、样本多样性，样本通量可达96个样本，支持灵活设定

3、开放式平台，支持用户自行开发试剂、产品。

二、灵敏度高，准确性高

1、***定量——无需依赖标准曲线

2、采用微滴式技术高达100,000个的微滴

3、线性范围达到6个数量级，灵敏度高达万分之一

三、可分析复杂混合物

1、准确度不完全依赖于扩增效率

2、双通道荧光检测，支持EvaGreen染料及探针法

3、支持多重数字PCR

四、操作简单，使用方便

1、全封闭防污染设计，一键式自动化操作。

2、可选全中文分析软件 **行业的10万个微滴数，保证泊松分布所需要的充分的样本量。无锡广东数字PCR正规代理

支持多重数字PCR，可选全中文分析软件。上海国产数字PCR正规代理

与常规PCR方法相比，数字PCR有如下优势：

       1、能够完全定量：常规PCR定量需要制定已知拷贝数的标准DNA曲线，但是由于待检样本与标准曲线不在统一体系，条件上会存在差异，另外加上PCR扩增效率的差异从而影响定量结果的准确性。而数字PCR不受标准曲线和扩增动力学影响，可进行完全定量。

       2、样本需求量低：适用于珍贵样本或核酸降解严重的样本

       3、灵敏度高：数字PCR是将传统PCR反应体系分割成数万个**PCR反应，这些反应可以精确地检测很小的目的片段差异、单拷贝甚至低浓度的混杂样本。且能避免非同源异质双链的形成。

       4、高耐受性：由于目的序列被分配到多个**反应体系中，明显降低了背景信号和yì zhì物对反应的干扰，扩增基质效应大大减小。

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