脱盐/缓冲液置换并浓缩
5次低速离心,总耗时~35分钟
1. 在上样池中加入0.5 mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1 min。
2. 优化选做:加入1.5 mL用于置换的缓冲液,1,000×g离心1 min。
3. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(有5种截留分子量规格可选)。
4. 加入1.5 mL样品,4,000×g离心15 min进行浓缩。
5. 加入1.5 mL需要置换的缓冲液,4,000×g离心15 min,换液的同时进行浓缩。
6. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管,1,000×g离心回收处理好的蛋白。
* 进行较大体积操作时,可以适当延长离心时间,也可参考Amicon® Pro完整操作说明书
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通量(超滤效率)及其影响因素
超滤过程中需要在速率和回收率之间平衡以期获得比较好的效果。滤膜的
通量的定义是流量除以面积,使用高 NMWL 滤膜可以增加通量,但同时
会降低回收率。选择膜和装置时需要同时考虑截留分子量和通量。而参
与影响通量的因素很多,包括:
压力:较为稀释的蛋白溶液或胶体悬液进行超滤时,流量随着跨膜压力
(TMP)的增大而增加。正压条件下操作,如 Stirred Cell 搅拌式超滤杯,
这种因素影响较为明显。如果极化影响***,通量会达到一个平台,甚
至可能随着压力的增加而降低。 黄浦区默克2ml超滤浓缩管联系方式您了解 超滤浓缩管的优势吗?
首先,Amicon® Ultra超滤管的蛋白比较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次,如果问题仍然出现,请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因:
1)如果目的样本在滤过液中,那么请排查:
a)是否选择了合适截留分子量的超滤管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)?
b)使用的离心力是否是在限定范围内?如果使用的是rpm,请换算成相应的g离心力,具体换算方法请垂询。
c)离心机**近是否有校准过?
d)是否***尝试这个蛋白?
近年来随着分离纯化技术的提高,关于外泌小体的研究成果颇丰;这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索,已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求,以及起始样品的规模、数量,可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒,对操作人员也没有特别的经验要求,超滤法后来居上,成为实验室中制备外泌体的通用方法。上海超滤浓缩管销售公司。
超滤(UF)常用于分离溶液中极其微小的颗粒和不溶分子。虽然分离效果受到包括化学性质、电荷等多种因素影响,这种方法主要还是以分子大小为**基本的考虑。超滤膜截留1-1000kDa(MW)的分子,盐和水等小分子会透过,因此在大分子样品处理中得到了应用。胶状或微粒状物质也能够被截留。UF膜既可以用于透过样品也用于保留样品的纯化。样品***小于膜孔径,则经过膜处理可以达到除热源、澄清和与大分子污染物的分离的效果。如果目的分子远远大于膜孔径,膜处理则可以将小分子污染物去除而目的分子被浓缩。超滤方法相比沉淀法对于样品更温和,没有发生容易导致生物大分子失活的相变,而且在浓缩的同时可以完成对溶质的除盐。超滤的应用不限于蛋白样品的操作,也常用于核酸样品制备,包括分子克隆和质粒纯化。DNA和RNA样品起始浓度低至5ng/mL也可以被高效地在数分钟内被浓缩,回收率达到99%以上。超滤浓缩管服务电话是多少呢。崇明区离心浓缩管订购
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经典离心浓缩装置
Amicon® Ultra 离心超滤管
反转离心回收
•反转离心回收设计使蛋白样品,特别是小体积样品高效
回收,避免***头吸取造成的样品丢失或操作错误
•0.5mL、2mL 和 70mL 超滤管设计为反转回收模式
样品吸附损失小
•Ultracel® 超滤膜为密理博超滤产品特有的设
计,非特异吸附比较低,减少样品的吸附损失
•膜和聚丙烯管都是低吸附材质,保证> 90%
回收率
•竖膜切向流设计,不像横膜那样容易堵,样品
损失少
•浓缩速度超快,**少*需 10 分钟
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上海益启生物科技有限公司主营品牌有默克密理博,默克, 密理博, 西格玛 ,安倍, 罗氏, 普兰德 ,发展规模团队不断壮大,该公司贸易型的公司。是一家私营合伙企业企业,随着市场的发展和生产的需求,与多家企业合作研究,在原有产品的基础上经过不断改进,追求新型,在强化内部管理,完善结构调整的同时,良好的质量、合理的价格、完善的服务,在业界受到宽泛好评。公司拥有专业的技术团队,具有试剂,耗材,科研试剂,仪器设备等多项业务。益启生物以创造***产品及服务的理念,打造高指标的服务,引导行业的发展。