外泌体的精制磁珠法富集精制外泌体：300μg样品（相当于300μg总蛋白）用含有5μg anti-CD63抗体的溶液稀释，与protein A/G磁珠共孵育1hr，漂洗后用0.2M glycine洗脱。如果要先将抗体偶联在磁珠上（以避免抗体洗脱下来对外泌体的干扰），请参考默克磁珠操作说明书。（Protocol C - Antibody Crosslinking Using Bis(sulfosuccinimidyl) suberate (BS3)）。推荐使用试剂目录号信息：cat# CBL553t 和cat# OP171以及LSKMAGAG02。
默克已经建立了基于“微滤+超滤”的外泌体制备操作标准，相较于需要昂贵的设备及繁琐操作的超速密度梯度离心，用实验室常见的工具解决外泌体制备的高大上问题，真是惠而不费，不亦乐乎？ 超滤浓缩管直销公司。上海默克超滤浓缩管订购
Amicon® Ultra 4 mL 超滤管
-离心速度快而保持很高的回收率
4 种不同蛋白在不同截留分子量的 Amicon®
Ultra 4mL 超滤管中浓缩（3kDa 细胞色素 C，
10kDa 细胞色素 C，30kDa BSA，100kDa IgG），
测定在离心一定时间后的回收率。数据显
示所有样品在离心 15 分钟左右回收率均
>95%。
为了方便初次使用者选择**合适的超
滤管产品，默克密理博生命科学部网
站上提供选择指引，您只需要按照提
示进行选择，**终会选出一款产品。
为每次实验选择**合适的，
您也能快速成为超滤高手！ 静安区默克15ml超滤浓缩管代理价格上海超滤浓缩管代理销售电话多少？
上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管（有5种截留分子量规格可选）。
6. 加入1 mL洗脱缓冲液与树脂混匀。孵育5 min。
7. 4,000×g离心15 min。
8. 加上蛋白样品**终需要的缓冲液1.5 mL。4,000×g离心15 min，置换缓冲液的同时进行浓缩。
9. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管，1,000×g离心回收纯化和浓缩好的蛋白。
* 本操作受Amicon® Ultra-0.5 mL超滤管～1 mg蛋白的容量限制。体积较大而蛋白浓度较低的情况下也可以采用如上方法，但溶液体积和离心时间等需要略加优化。
用Protein A或G对抗体进行亲和纯化
加入漂洗缓冲液（体积是树脂柱床体积的7.5倍）并离心。< 500μL树脂时1,000×g离心1 min；≥ 500μL树脂时2,000×g离心4 min。
4. 使用一个新的50 mL离心管作为收集管。
5. 加入洗脱缓冲液（体积是树脂柱床体积的5倍）与树脂混匀并离心。< 500μL树脂时1,000×g离心1 min；≥ 500μL树脂时2,000×g离心4 min。回收管中即纯化好的蛋白。
6. 如果是纯化抗体，在纯化产物中加入中和缓冲液。
* 进行较大体积操作时，可以延长结合反应时间，并用胶带密封上样池上沿以便颠倒混匀操作。离心前去除胶带即可。选购不带Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管的Amicon® Pro时请使用目录号ACS500024。 上海超滤浓缩管销售公司。
脱盐/缓冲液置换并浓缩
5次低速离心，总耗时~35分钟
1. 在上样池中加入0.5 mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1 min。
2. 优化选做：加入1.5 mL用于置换的缓冲液，1,000×g离心1 min。
3. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管（有5种截留分子量规格可选）。
4. 加入1.5 mL样品，4,000×g离心15 min进行浓缩。
5. 加入1.5 mL需要置换的缓冲液，4,000×g离心15 min，换液的同时进行浓缩。
6. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管，1,000×g离心回收处理好的蛋白。
* 进行较大体积操作时，可以适当延长离心时间，也可参考Amicon® Pro完整操作说明书
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通量（超滤效率）及其影响因素
超滤过程中需要在速率和回收率之间平衡以期获得比较好的效果。滤膜的
通量的定义是流量除以面积，使用高 NMWL 滤膜可以增加通量，但同时
会降低回收率。选择膜和装置时需要同时考虑截留分子量和通量。而参
与影响通量的因素很多，包括：
压力：较为稀释的蛋白溶液或胶体悬液进行超滤时，流量随着跨膜压力
（TMP）的增大而增加。正压条件下操作，如 Stirred Cell 搅拌式超滤杯，
这种因素影响较为明显。如果极化影响***，通量会达到一个平台，甚
至可能随着压力的增加而降低。 上海默克超滤浓缩管订购
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