浓度:当需要截留的样品浓度很低时,通量通常不受浓度影响。操作过
程中,随着溶质浓度的升高,增加的粘滞性和极化将导致通量降低。
温度:粗体,作为获得压力、浓度一样的词条通常增加操作时的温度可
以提高超滤效率。每增加 1℃蛋白扩散率增加 3-3.5%,同时溶液粘度降低。
实践中一般是以样品和设备能耐受的比较高温度来操作。
pH:改换溶液和 / 或 pH 常常改变分子结构,蛋白尤其如此。在蛋白的 pI
值蛋白会沉淀,产生堵塞和得率损失。
污垢:溶液中除了目的分子造成的浓差极化,还有其它小颗粒和分子会
在膜上富集和沉淀,逐渐堆积在膜孔上或膜孔结构中,形成结晶和沉淀。 超滤浓缩管直销公司。南京默克15ml超滤浓缩管批发
上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(有5种截留分子量规格可选)。
6. 加入1 mL洗脱缓冲液与树脂混匀。孵育5 min。
7. 4,000×g离心15 min。
8. 加上蛋白样品**终需要的缓冲液1.5 mL。4,000×g离心15 min,置换缓冲液的同时进行浓缩。
9. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管,1,000×g离心回收纯化和浓缩好的蛋白。
* 本操作受Amicon® Ultra-0.5 mL超滤管~1 mg蛋白的容量限制。体积较大而蛋白浓度较低的情况下也可以采用如上方法,但溶液体积和离心时间等需要略加优化。
用Protein A或G对抗体进行亲和纯化 黄浦区Merck超滤浓缩管一级代理益启生物公司主要超滤浓缩管代理销售。
Amicon® Pro纯化超滤管简明操作指南
亲和纯化
用于纯化GST•Tag,His•Tag等重组表达蛋白及抗体,适合~0.5 mL裂解液操作
6次低速离心,总耗时~100分钟(含65分钟孵育时间)
1. 在Amicon® Pro上样池中加入200μL亲和纯化树脂(50%悬浊液)和1.5 mL漂洗缓冲液。
1,000×g离心1 min。
2. 加入0.5 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h,其间可温和搅动促进结合。
3. 1,000×g离心1 min 以去除未结合杂质。
4. 加入1.5 mL漂洗缓冲液,1,000×g离心1 min。
默克密理博 Amicon® Ultra 离心式超滤管因其完美的设计,一经推出即成为生物样品操作的行业**产品。不论是蛋白、核酸、病-毒-或颗粒物,抑或低浓度样品或宝贵的活性样品,Amicon® Ultra 都能兼顾高回收率和操作的方便性及标准化,并满足下游各种应用的要求,使研究者处理样品时倍感轻松。
这款Amicon Ultra 15 mL离心式过滤器借助10 kDa NMWL的滤膜可以进行蛋白浓缩。Amicon Ultra离心式过滤器是蛋白纯化、蛋白浓缩和脱盐的理想工具。
Amicon® Ultra 超滤管的独特优点:
有效浓缩同时保证高的蛋白回收率
1.合理的死体积设计
2.避免样品离干而降低回收率
3.便于估计和控制样品浓缩倍数
4.重复性好,便于样品数据相互比较
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Amicon® Ultra 4 mL 超滤管
-离心速度快而保持很高的回收率
4 种不同蛋白在不同截留分子量的 Amicon®
Ultra 4mL 超滤管中浓缩(3kDa 细胞色素 C,
10kDa 细胞色素 C,30kDa BSA,100kDa IgG),
测定在离心一定时间后的回收率。数据显
示所有样品在离心 15 分钟左右回收率均
>95%。
为了方便初次使用者选择**合适的超
滤管产品,默克密理博生命科学部网
站上提供选择指引,您只需要按照提
示进行选择,**终会选出一款产品。
为每次实验选择**合适的,
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抗体标记
适合25-200μg样品操作
5次低速离心,总耗时~50分钟
1. 在上样池中加入0.5 mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1 min。
2. 加入抗体样品
• 对于比较稀释的样品(< 1 mg/mL)
- 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(建议使用50k MWCO)。
- 加上至多1 mL抗体样品, 4,000×g离心15 min。
• 对于浓度较高的的样品(≥ 1 mg/mL)
- 在Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(建议使用50k MWCO)中加入至多100μL样品。
- 将装有样品的Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管接在Amicon®Pro上样池的下端。
3. Amicon®Pro上样池内加入预先准备好的1.5 mL含有染料的反应混合液。
4. 4,000×g离心15 min。
5. 优化选做:将样品在室温下多孵育30 min。
6. 上样池中加入1.5 mL PBS± NaN3。
7. 4,000×g离心15 min换液同时浓缩。
8. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管1,000×g离心回收标记好的抗体。 南京默克15ml超滤浓缩管批发
上海益启生物科技有限公司位于漕宝路400号明申商务广场907、908,是一家专业的 从事生物科技(除生物试剂)领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让;室内外装潢;建筑工程设计与施工;展览展示服务;计算机及配件、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、民用物品、易制毒化学品)实验室设备、服装服饰及辅料、仪器仪表、电子数码产品、普通劳防用品、文体用品的销售。公司。在益启生物近多年发展历史,公司旗下现有品牌默克密理博,默克, 密理博, 西格玛 ,安倍, 罗氏, 普兰德 等。公司以用心服务为重点价值,希望通过我们的专业水平和不懈努力,将 从事生物科技(除生物试剂)领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让;室内外装潢;建筑工程设计与施工;展览展示服务;计算机及配件、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、民用物品、易制毒化学品)实验室设备、服装服饰及辅料、仪器仪表、电子数码产品、普通劳防用品、文体用品的销售。等业务进行到底。自公司成立以来,一直秉承“以质量求生存,以信誉求发展”的经营理念,始终坚持以客户的需求和满意为重点,为客户提供良好的试剂,耗材,科研试剂,仪器设备,从而使公司不断发展壮大。