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核苷酸截留分子量（NCO）

超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的，适合各种蛋白研究，但在核酸

和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏

过，相对于球形蛋白需要更致密的膜（截留分子量更小）。所以选择

滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。

浓差极化

浓差极化实质是溶质累积在膜表面造成的堵塞，产生除了膜本身截留分

子量以外的过滤限制。当溶质浓度较高时，会形成相当于第二层滤膜作

用的胶体层，干扰分子通过滤膜，同时降低流速。pH 值、缓冲液的成分

也会影响目的分子的状态而使浓差极化现象加剧或减轻。

近年来随着分离纯化技术的提高，关于外泌小体的研究成果颇丰；这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索，已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求，以及起始样品的规模、数量，可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒，对操作人员也没有特别的经验要求，超滤法后来居上，成为实验室中制备外泌体的通用方法。徐汇区默克15ml超滤浓缩管一级代理你知道上海超滤浓缩管代理销售哪家比较好吗？

截留

截留有时也称为排阻。水合程度、离子和空间位置效应会导致分子量相近

的分子表现非常不同的截留状态。许多生物大分子在不同的 pH 或离子强

度改变的情况下倾向于聚集或改变构象，因此其有效大小可能比 “天然”

分子大恨多，从而导致排阻增加。比如，有些蛋白质在某些缓冲液条件下

会发生多聚化，而另一些则发生解聚（如血红素蛋白）成亚基。这使选择

合适截留分子量的膜变得复杂。以默克密理博的经验，我们通常推荐选择

为目的分子大小一半的膜作为尝试的优先，再根据实际情况加以调整。

用超滤对分子进行分级

通过选定截留分子量的超滤操作能精确地将混在大分子中的小分子去

除的想法常常不切实际。事实上，膜的规格描述是基于截留而非通过

的性质。一项实验中，采用 100k NMWL 滤膜，大于 100kDa 的分子截

留率 >90%，但这时比膜孔径小的分子并不是完全自由地通过滤膜，

75kDa 的分子截留率为 83%，30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的

溶液中的各 种成分通过膜并不像单一成分的溶液那么简单和容易。实

践中，如果要分离两种大分子，它们之间的分子量差异应该达到 10 倍

以上，或至少膜的 NMWL 规格在两种蛋白之间，则可达到比较理想的

分离。如果蛋白溶液较为稀释，低压下操作也有助于达到更好的效果。 超滤浓缩管哪家比较靠谱？

基于 Millipore® 先进的膜过滤技术，默克密理博开发了独特的腺***及慢***纯化与浓缩试剂盒。试剂盒中已经包括了必需的 Steriflip® 过滤装置和超滤管，能在短短 2 小时内安全、快捷地获得高产***。

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无血清样品选择 3kDa 孔径是为了尽可能提高外泌体的回收率。

有血清样品选择100kDa/500kDa孔径是为了尽可能去除细胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌体的白蛋白造成的影响。

研究者可根据样品的粘稠程度，以及需要制备的目标外泌体 / 囊泡 / 颗粒的大小分布来选择和优化超滤孔径(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa)，以便达到更好的得率和操作体验。

样品体积大于 30mL 时可以考虑用超滤杯或 Centricon-70 超滤管，请注意搅拌式超滤杯在200mL 以内时吸附损耗可能较离心式超滤管略偏高。如需进一步提高特定外泌体的纯度，可选用包被相应抗体的磁珠进行亲和纯化精制。 徐汇区默克15ml超滤浓缩管一级代理

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