无血清样品选择 3kDa 孔径是为了尽可能提高外泌体的回收率。
有血清样品选择100kDa/500kDa孔径是为了尽可能去除细胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌体的白蛋白造成的影响。
研究者可根据样品的粘稠程度,以及需要制备的目标外泌体 / 囊泡 / 颗粒的大小分布来选择和优化超滤孔径(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa),以便达到更好的得率和操作体验。
样品体积大于 30mL 时可以考虑用超滤杯或 Centricon-70 超滤管,请注意搅拌式超滤杯在200mL 以内时吸附损耗可能较离心式超滤管略偏高。如需进一步提高特定外泌体的纯度,可选用包被相应抗体的磁珠进行亲和纯化精制。 超滤浓缩管具体报价多少呢。青浦区默克离心浓缩管参数
这是一种只用一步温和的离心完成渗滤而很大程度保持蛋白活性的好方法。
为了与下游应用兼容,常常需要用透析或渗滤方法对蛋白样品进行缓冲液置换。传统透析方法需要时间很长,多步透析容易造成样品丢失、损耗和失活,而且***还需要一步浓缩。新产品 Amicon® Pro 带来了突破性的革新,只需一步温和的渗滤操作即可达到同时对样品进行换液和浓缩的目的。
Amicon® Pro建立小量蛋白样品纯化-换液/ 脱盐-浓缩流程 新标准
操作步骤的优化与简化往往带来更好的结果,数据的稳定性、可比性和高通量化随之得以改
善,默克密理博新上市的Amicon® Pro纯化超滤管创造性地将纯化、换液、脱盐和浓缩操作融为一体,减少样品转移损失和人为操作的繁琐和误差,使蛋白样品的处理更加标准化,数据结果便于评估和比较。宝贵的小量样本从此有了比较好的操作工具。 南京默克4ml超滤浓缩管咨询问价上海超滤浓缩管销售公司。
外泌体用于细胞学或动物实验前的无菌处理
已经经过上述方法制备的外泌体在进行细胞或动物实验之前还需进行一步除菌过滤,这个时候考虑到得率,应该采用离心法处理,以减少过滤时的外泌体样品损失。
超滤方法纯化具体操作步骤举例
Amicon® Ultra-15 超滤管 (10 kDa MWCO)
用Steriflip®真空抽滤对样品进行澄清[目录号SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]
用PBS平衡Amicon® Ultra-15 超滤管(目录号UFC901024,10 kDa MWCO) ,4000g离心 X 10 min。
从超滤管内管及收集管吸走PBS。向超滤管加入15 mL 样品。4000g 离心30 min 浓缩。倒空收集管。加入14 mL PBS 进行缓冲液置换,温柔吸打样品数次。4000g离心 30 min。从浓缩管吸回处理好的样品。(30X 浓缩)
注意 : 所有 Amicon® Ultra 超滤管 (0.5, 2, 4 和 15 mL) 与此操作流程兼容 *
基于 Millipore® 先进的膜过滤技术,默克密理博开发了独特的腺***及慢***纯化与浓缩试剂盒。试剂盒中已经包括了必需的 Steriflip® 过滤装置和超滤管,能在短短 2 小时内安全、快捷地获得高产***。
节约时间:整个操作*需 2 小时。
产量高:***回收率超过 70%。
整体体验极好:流程简便而***质量高。
设计新颖易操作:Steriflip® 过滤装置可以替代昂贵的设备,使原本繁琐凌乱的操作变得简单而标准。
安全:封闭的真空抽滤设计,完全避免样品飞溅造
成的***污染和损失。 超滤浓缩管服务电话是多少呢。
特点与优点:
高产:没有样品转移,损失更少
温和:特别的渗滤设计使换液过程更温和
快速:从细胞裂解到纯化、优化一共*需要5次低速离心
灵活:一种离心方法,***支持各种样品制备所需
蛋白缓冲液置换、脱盐和透析
每一种蛋白的制备都是***的,常常需要摸索和优化。应该考虑为特定蛋白选择相应的工具进行换液和透析。您可以从操作较快 Amicon® Pro 的渗滤法或更温和的 D-Tube™透析法中选择更适合样品的操作方法。
选择更直接而有效的方法!
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益启生物公司的 超滤浓缩管种类繁多。青浦区默克离心浓缩管参数
7次低速离心,总耗时~100分钟(含60分钟孵育时间)
1. 在Amicon® Pro上样池中加入200μL亲和纯化树脂(50%悬浊液)和1.5 mL漂洗缓冲液。
1,000×g离心1 min。
2. 加入0.5 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h,其间可温和搅动促进结合。
3. 1,000×g离心1 min 以去除未结合杂质。
4. 加入1.5 mL漂洗缓冲液,1,000×g离心1 min。
5. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(可选用50k MWCO型号)。
6. 加入1 mL洗脱缓冲液与树脂混匀。4,000×g离心5 min。
7. 加入200μL 中和缓冲液。4,000×g离心15 min。
8. 加上**终需要的缓冲液1.5 mL。4,000×g离心15 min,置换缓冲液的同时进行浓缩。
9. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管,1,000×g离心回收纯化和浓缩好的蛋白。 青浦区默克离心浓缩管参数
上海益启生物科技有限公司致力于化工,以科技创新实现***管理的追求。益启生物拥有一支经验丰富、技术创新的专业研发团队,以高度的专注和执着为客户提供试剂,耗材,科研试剂,仪器设备。益启生物继续坚定不移地走高质量发展道路,既要实现基本面稳定增长,又要聚焦关键领域,实现转型再突破。益启生物创始人张文渊,始终关注客户,创新科技,竭诚为客户提供良好的服务。