外泌体用于细胞学或动物实验前的无菌处理
已经经过上述方法制备的外泌体在进行细胞或动物实验之前还需进行一步除菌过滤,这个时候考虑到得率,应该采用离心法处理,以减少过滤时的外泌体样品损失。
超滤方法纯化具体操作步骤举例
Amicon® Ultra-15 超滤管 (10 kDa MWCO)
用Steriflip®真空抽滤对样品进行澄清[目录号SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]
用PBS平衡Amicon® Ultra-15 超滤管(目录号UFC901024,10 kDa MWCO) ,4000g离心 X 10 min。
从超滤管内管及收集管吸走PBS。向超滤管加入15 mL 样品。4000g 离心30 min 浓缩。倒空收集管。加入14 mL PBS 进行缓冲液置换,温柔吸打样品数次。4000g离心 30 min。从浓缩管吸回处理好的样品。(30X 浓缩)
注意 : 所有 Amicon® Ultra 超滤管 (0.5, 2, 4 和 15 mL) 与此操作流程兼容 * 超滤浓缩管应用领域你知道吗。无锡浓缩管规格
特别推荐应用(提供实验报告作为参考)
Microcon®超滤管:
Microcon®PCR 级超滤管:
• 法医鉴定分析的DNA样品制备
• 生物大分子样品浓缩、脱盐及缓冲液置换
• 体外合成mRNA的纯化
• 以人mRNA或总RNA制备荧光DNA探针
• 游离标记物的去除
• 纳克级核酸的定量回收及大片段DNA完整性研究
• 替代乙醇沉淀,离心法高效浓缩基因组DNA
应用指南
典型应用
肽及生长因子浓缩
蛋白浓缩与脱盐
电泳等操作前的蛋白样品浓缩
HPLC前去除蛋白
组织培养抽提物和细胞裂解液中大分子成分的纯化
生物样本浓缩(抗原,抗体,酶等)
从含有SDS(或无SDS)的缓冲液中浓缩gDNA
核酸浓缩与脱盐(单链或双链核酸)
去除标记核苷酸
去除标记氨基酸
从扩增的DNA产物中去除引物
克隆前去除连接序列(linker) 金山区默克离心浓缩管参数益启生物公司的 超滤浓缩管系列有很多。
蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白浓缩后的**终浓度不超过
20mg/ml。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白,建议的改进方法是:
1)离心力降为推荐离心力的30%-50%
2)改用截留分子量更大的超滤管(如原本选用10k,此时可以选择30k) 3)在浓缩过程中取出超滤管,用***头反复吹吸几次后再继续浓缩
Amicon® Ultra超滤膜中含有微量甘油。如果出现这种情况,请先用0.1 N NaOH清洗再离心。***用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用,如暂时不用,请保持润湿状态,避免重新干燥。
基于 Millipore® 先进的膜过滤技术,默克密理博开发了独特的腺***及慢***纯化与浓缩试剂盒。试剂盒中已经包括了必需的 Steriflip® 过滤装置和超滤管,能在短短 2 小时内安全、快捷地获得高产***。
节约时间:整个操作*需 2 小时。
产量高:***回收率超过 70%。
整体体验极好:流程简便而***质量高。
设计新颖易操作:Steriflip® 过滤装置可以替代昂贵的设备,使原本繁琐凌乱的操作变得简单而标准。
安全:封闭的真空抽滤设计,完全避免样品飞溅造
成的***污染和损失。 超滤浓缩管的优势您了解多少呢?
Amicon® Ultra 4 mL 超滤管
-离心速度快而保持很高的回收率
4 种不同蛋白在不同截留分子量的 Amicon®
Ultra 4mL 超滤管中浓缩(3kDa 细胞色素 C,
10kDa 细胞色素 C,30kDa BSA,100kDa IgG),
测定在离心一定时间后的回收率。数据显
示所有样品在离心 15 分钟左右回收率均
>95%。
为了方便初次使用者选择**合适的超
滤管产品,默克密理博生命科学部网
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高浓度样品浓缩
Centriprep®超滤管
Centriprep®超滤管是一次性使用的离心管,可以用于2-15mL生物样品的纯化、浓缩、脱盐等过滤应用。这种离心超滤管流速很快,设计紧凑,螺旋盖使用起来非常方便,过滤收集管内置低吸附的Ultracel®再生纤维素膜,装有气密盖。
优点与应用
特有的反向流操作模式,较大的死体积
采用Ultracel®膜,用于浓缩和纯化富含颗粒物
的高浓度样品,样品回收率>90%
配合标准的50mL离心管吊篮式转子使用
从发酵培养基、细胞培养基、细胞裂解液中分
离低分子量溶质 无锡浓缩管规格
上海益启生物科技有限公司致力于化工,是一家贸易型公司。公司业务分为试剂,耗材,科研试剂,仪器设备等,目前不断进行创新和服务改进,为客户提供良好的产品和服务。公司秉持诚信为本的经营理念,在化工深耕多年,以技术为先导,以自主产品为重点,发挥人才优势,打造化工良好品牌。益启生物立足于全国市场,依托强大的研发实力,融合前沿的技术理念,飞快响应客户的变化需求。