上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管（有5种截留分子量规格可选）。
6. 加入1 mL洗脱缓冲液与树脂混匀。孵育5 min。
7. 4,000×g离心15 min。
8. 加上蛋白样品**终需要的缓冲液1.5 mL。4,000×g离心15 min，置换缓冲液的同时进行浓缩。
9. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管，1,000×g离心回收纯化和浓缩好的蛋白。
* 本操作受Amicon® Ultra-0.5 mL超滤管～1 mg蛋白的容量限制。体积较大而蛋白浓度较低的情况下也可以采用如上方法，但溶液体积和离心时间等需要略加优化。
用Protein A或G对抗体进行亲和纯化 超滤浓缩管和其他的空压机有什么区别呢？青浦区默克0.5ml超滤浓缩管哪家好
浓度：当需要截留的样品浓度很低时，通量通常不受浓度影响。操作过
程中，随着溶质浓度的升高，增加的粘滞性和极化将导致通量降低。
温度：粗体，作为获得压力、浓度一样的词条通常增加操作时的温度可
以提高超滤效率。每增加 1℃蛋白扩散率增加 3-3.5%，同时溶液粘度降低。
实践中一般是以样品和设备能耐受的比较高温度来操作。
pH：改换溶液和 / 或 pH 常常改变分子结构，蛋白尤其如此。在蛋白的 pI
值蛋白会沉淀，产生堵塞和得率损失。
污垢：溶液中除了目的分子造成的浓差极化，还有其它小颗粒和分子会
在膜上富集和沉淀，逐渐堆积在膜孔上或膜孔结构中，形成结晶和沉淀。 普陀区默克4ml超滤浓缩管代理价益启生物公司专业致力于 超滤浓缩管代理销售。
外泌体用于细胞学或动物实验前的无菌处理
已经经过上述方法制备的外泌体在进行细胞或动物实验之前还需进行一步除菌过滤，这个时候考虑到得率，应该采用离心法处理，以减少过滤时的外泌体样品损失。
超滤方法纯化具体操作步骤举例
Amicon® Ultra-15 超滤管 (10 kDa MWCO)
用Steriflip®真空抽滤对样品进行澄清[目录号SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]
用PBS平衡Amicon® Ultra-15 超滤管(目录号UFC901024,10 kDa MWCO) ，4000g离心 X 10 min。
从超滤管内管及收集管吸走PBS。向超滤管加入15 mL 样品。4000g 离心30 min 浓缩。倒空收集管。加入14 mL PBS 进行缓冲液置换，温柔吸打样品数次。4000g离心 30 min。从浓缩管吸回处理好的样品。(30X 浓缩)
注意 : 所有 Amicon® Ultra 超滤管 (0.5, 2, 4 和 15 mL) 与此操作流程兼容 *
高浓度样品浓缩
Centriprep®超滤管
Centriprep®超滤管是一次性使用的离心管，可以用于2-15mL生物样品的纯化、浓缩、脱盐等过滤应用。这种离心超滤管流速很快，设计紧凑，螺旋盖使用起来非常方便，过滤收集管内置低吸附的Ultracel®再生纤维素膜，装有气密盖。
优点与应用
特有的反向流操作模式，较大的死体积
采用Ultracel®膜，用于浓缩和纯化富含颗粒物
的高浓度样品，样品回收率>90%
配合标准的50mL离心管吊篮式转子使用
从发酵培养基、细胞培养基、细胞裂解液中分
离低分子量溶质 超滤浓缩管的系列有很多。
蛋白亲和纯化（无需换液和浓缩）
* 本操作受Amicon® Ultra-0.5 mL超滤管～1 mg蛋白的容量限制。体积较大而蛋白浓度较低的情况下也可以采用如上方法，但溶液体积和离心时间等需要略加优化。
3次低速离心，总耗时~75分钟（含60分钟孵育时间）
1. 在Amicon® Pro上样池中加入至多1000μL亲和纯化树脂（沉降的柱床体积）和至多9 mL漂洗缓冲液。1,000×g离心1 min平衡树脂。（柱床）树脂量≥ 500μL时采用2,000×g离心4 min。
2. 加入至多9 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h*，其间可温和搅动促进结合。 超滤浓缩管零售多少钱呢？青浦区默克0.5ml超滤浓缩管哪家好
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如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用上一分子量级别的超滤管（如原本选用30k，此时可以选择10k）。
2）如果目的样本也不在滤过液中，那么：
a）蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL？ b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是的，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。 青浦区默克0.5ml超滤浓缩管哪家好
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