常州微滴式数字PCR如何选型

基因检测**前沿的两种方法是：高通量测序（NGS）和数字PCR (dPCR)。

      高通量测序技术又称“下一代”测序技术，可以一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，功能强大，但是实验操作较复杂，数据分析难度较大，检测周期长，成本较高。数字PCR技术是目前**精细**灵敏的基因检测技术，借助微液滴或微腔室，通过单个模板分子的PCR扩增，可实现不依赖于标准曲线和参照样本的***定量。与NGS相比，数字PCR灵敏度高、检测速度快、操作简便、结果易读、成本低廉等优势使其更适合临床检测，成为精细医疗实现平民化、大众化的比较好选择。    

此外，数字PCR还在基因表达差异研究、拷贝数变异(CNV)研究、低丰度DNA模板分子的精确定量、甲基化含量鉴定、二代测序辅助建库、CRISPR-Cas9基因编辑结果验证、转基因成分的检测、移植排异监控、肠道菌群分析以及***基因组检测等众多领域中有着优异的应用。

能检测低至0.01%的突变基因。常州微滴式数字PCR如何选型

数字PCR是一种核酸分子***值定量技术，能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的***值定量。该试剂盒采用创新的一步法逆转录数字PCR技术，将*****的RNA逆转录及数字PCR扩增整合到一个反应体系，单管双检同时测定*****的两个**基因，消除***变异带来的漏检风险。

MicroDrop-100全新微滴式数字PCR系统为永诺生物旗下子公司永诺医疗自主研发的检测设备，此系统检测无需依赖标准物质，可达到***定量，具有超高灵敏度，检测灵敏度高达1个拷贝，且具有较好的重复性，降低同样本不同批次的检测差异。数字PCR结果采取终点判读法，相比荧光定量PCR的过程性读取可有效降低对PCR 扩增效率的依赖、降低PCR***物对检测结果的影响，对于复杂样本也能提供稳定的检测结果等特点，在******临床实验及***患者的治疗过程中可发挥重要作用。 上海广州永诺数字PCR品牌不依赖Ct值，无需标准曲线。

要了解为什么传统 PCR 存在限制，务必要了解 PCR 反应过程中发生了什么。基本 PCR 运行可以分为三个阶段：

指数期

每个循环积聚的产物准确加倍（假定 ** 反应效率）。该反应具有高度特异性和精确度。出现指数式扩增，因为所有试剂均新鲜可用，反应的动力学推动反应有利于扩增子加倍。

线性期（高变异性）

随着反应继续，一些试剂因扩增而被消耗。反应开始减缓，并且每个循环的 PCR 产物不再加倍。

平台期（终点：使用传统方法进行凝胶检测）

反应停止，不再产生更多产物，并且如果放置时间够长，PCR 产物将开始降解。因为每个样品具有不同的反应动力学，所以每支试管或每个反应将在不同的时间点进入平台期。在平台期可以看到这些差异。在平台期内，传统 PCR 进行测量，又称为终点检测。

**个体化诊疗

通过检测T790M位点突变情况，可以更好地评估一代TKI***的疗效及耐药情况并指导第三代TKI靶向药Osimertinib的使用。然而，由于qPCR平台ARMS检测技术的灵敏度有限，没有办法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效准确的检测到T790M突变。这个时候dPCR技术展现出了****的检测精度，此外，dPCR***定量的优势也能充分发挥出来了，可以监控突变含量变化，做到及早发现耐药。

2.）基因表达分析

伊马替尼（Imatinib）可以有效帮助很多慢性髓细胞白血病（CML）患者延长生存期，但是临床上发现，伊马替尼的疗效与BCR-ABL1融合基因的转录产物表达量有很大的关系。研究人员采用dPCR对CML患者的BCR-ABL1融合基因转录产物进行测定，结果检测下限可以达到0.001%，显示出dPCR在痕量核酸检测方面比qPCR具有无可比拟的优势 FAM、VIC双通道荧光检测。

超高灵敏度，适用于稀有序列及稀有突变的检测。常州微滴式数字PCR如何选型

dPCR的基本原理

目前dPCR主要有两种形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。 常州微滴式数字PCR如何选型

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