人类精子冷冻保存和储存：增加了冷冻样本的安全性、精液冷冻保存方案、快速液氮熏蒸冷冻、冷冻精液的解冻、玻璃化冷冻等内容，更具可操作性。本手册对人类精子的冷冻保存提出了具体建议：将样本分管分罐分开储存；对使用的材料和留存标本建立定期核验程序；所有储罐都应有液位监控报警系统，以监测温度和液氮液位，传感器应连接警报器，可通过实验室人员的终端进行提醒。新证据表明，玻璃化冷冻是冷冻保存精液的一种有价值的方法。该方法的原理是将小体积样本与无污染液氮直接接触并快速冷冻，可以防止冰晶的形成，并减少精子的渗透性损伤。在麦管玻璃化冷冻(无菌玻璃化冷冻)中，也可以使用封闭系统，不需要无菌的液氮。传统的CASA系统仍使用传统阈值图像处理方法，准确率有待提高。北京水生动物精子分析精子动力分析
通过比较进行质量评估1．室内比较是采用同一个标本在同一参数下经CASA多次测定后应用适当的统计学方法对测得数值进行比较。在男科实验室中对CASA系统的质量控制通常使用影像磁带或完全相同的冻存**标本进行日间比较。当室内比较作为结果质量的一种评估时计算机中数值的在线获得是极具优势的。2．室间比较要求标本向其他几个实验室运送文献中的一些报道阐述了该方面的经验但是运动精子是不能在不受限制的条件下运输的将其置于液氮中运送需进一步考虑更多的因素（解冻技术、标本的处理等）这些因素会影响活动力参数；到目前为止室间比较的研究还未见满意报道；Jorgensen等进行了研究尝试克服实验室间运送解冻标本的困难其研究方式是：邀请四个实验室的实验人员携带各自的仪器到同一个地点以各自通常采用的实验方法进行精子评估但未见明确的结论。3．对于精子活力测定CASA系统的测定与直观评估的比较有文献进行了报道但结果并不相同。认为直观评估揭示标准数值且其差异是由CASA系统的错误引起的该观点是不正确的；无论从理论上还是实践中CASA数值比直观评估所获得的数值更接近于真值；对直线前进的精子比例而言这一点是非常正确的。计数精子分析VAP通过计算机图像处理功能对显微镜下放大的精子图像进行识别和跟踪计算，从而得出精子动静态各项参数。
通过结果的生物学意义对结果质量进行评估当所有具生物学意义的参数在测试中表现出较小的可变性时则方法学可变性亦较低方法学可变性低则结果质量就高。CASA系统获得的数值与直观评估获得的数值进行分析和比较在精子数量和综合运动性上具有较好的相关性而·131·中国优生与遗传杂志2002第10卷第6期DOI:10．13404／j．cnki．cjbhh．2002．06．091在前向运动精子百分率上的相关性较低］。Holt等报道了在常规实验条件下采用五种不同的CASA系统对**参数值进行比较，其结果为：采用同一个测定池由不同的操作者测定**参数；变异系数（CV）是29％活动精子比率的CV为24％平均路径速度（VAP）的CV为43∙85％。作者们指出该分析结果不应看作是不同CASA系统间的工作情况的比较实际上它揭示了操作者的错误是差异的主要来源。目前有待于寻找进一步的标准来评估CASA变量的结果质量。精子***的生物学功能是使卵细胞授精因此用夫妇中的授精结果来考察精子运动性是合理的只有在该基础上能够确定活动性参数的重要性。辅助生殖技术（授精IVF）的发展使检测精子质量与各参数间的关系的比较成为可能；同样可以验证CASA测定结果与精子真实质量间的相关性有利于CASA结果质量的提高。
精子计数是在显微镜下计算一次排出的精液中精子的数量将精子计数值乘以精液量就可得出一次**的量。精液液化后将样本按一定比例稀释和固定后，滴于血细胞计数板上，在显微镜下计数红细胞计数区内的所有精子数并换算为每m1内所含精子数。此外还可用电子细胞计数仪经调整阈值设置后计数精子数量。将已经液化的精液标本均匀混合，用白细胞计数吸管吸精液至0.5刻度，再吸稀释液至11刻度，振荡三分钟，然后置于血球计数板内，计数二大格（每格面积1平方毫米）之精子数，在尾数后加5个“0”即得每毫升精液内精子数。例如计数为1280个，则每毫升精子应为128,000,000。精液稀释液之配制：重碳酸钠5克、福尔马林1毫升、蒸馏水加至100毫升。稀释液内重碳酸钠有消化粘液的作用，福尔马林有使精子制动的作用。如精液之稠度过高而不易吸取时，可以精液1毫升混匀于稀释液19毫升内，稀释后进行计数。如精子的数目极少，亦可改为稀释10倍计数。每次排精75%的精子是从附睾尾部所贮存的，还有25%是由输精管道的其他部分来的，因此单凭一次排精的精子计数来衡量睾丸生精机能是不***的。只有在排精后间隔4-5天以后多次精液检查，才能比较正确地从这些精子计数来反映睾丸的生精机能。Hamilton Thorne精子分析仪的操作简单易懂，用户无需具备专业知识也能够轻松上手使用。
CASA系统在男性生殖能力检验应用中的功能要求和参数设置CASA是将现代化的计算机技术和先进的图象处理技术应用于精子质量的临床检验，通过对精子动（静）态图象中精子特性的***分析，为临床提供有关精子质量各项指标的准确数据。CASA系统一般包括硬件和计算机软件支持系统几个部分：（1）相差显微镜、恒温装置和**技术板（Makler板、Macro板或MicroCell计数池等）；（2）高速、高分辨率的摄像机和电视监视器组成的摄像系统；（3）计算机分析处理系统及打印机打印输出。HAMILTON THORNE精子分析仪可分析参数，摆动性（WOB）：实际的曲线路径关于平均路径的摆动值。香港人精子分析DAP
CASA系统用量少，检测速度快，能够显著提高实验室的工作效率。北京水生动物精子分析精子动力分析
九、精液酸碱度(pH)检查[正常参考值]7.2-8.0。[临床意义]1．精液pH值＜7.0，多见于少精或无精症，常反映输精管道阻塞、先天性精囊缺如或附睾病变等。2．精液pH值＞8.0，常见于急性***，如精囊炎、前列腺炎等。十、男性生育力指数测定[计算公式]I=M(N×V)/（A×106）式中I为男性生育力指数；M为活动精子百分率；N为每毫升的精子数；V为精子运动的速度；A为畸形精子的百分率。[正常参考值]正常人生育力指数＞l。[临床意义]1．生育指数为0，表明完全无生育能力。2．生育指数为0-1之间，表明有不同程度的生育障碍。北京水生动物精子分析精子动力分析
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