精子手工计数原理及操作方法
1.原理：将精液用适当的稀释液作一定量稀释后，混匀注入计数池内计数，再算出每毫升精液中精子数。2.方法（按照***版第四版《全国临床检验操作规程》）1).于小试管内加精子稀释液0.38ml,取液化精液20μl,加入稀释液内混匀。2).充分摇匀后,滴入改良Neubauer计数板的计数池内,静置1~2分钟,待精子下沉后,以精子头部作为基准进行计数。
3.计算1).如每个**中方格内精子少于10个,应计数所有25个中方格内的精子数。2).如每个**中方格内精子在10~40个,应计10个中方格内的精子数。3).如每个**中方格内精子多于40个,应计数5个中方格内的精子数。公式：精子数=计数结果/计数中方格×25×1/计数池高度×20×103/ml=计数结果/计数中方格×1/计数池高度×5×103/ml CASA系统减少了人为因素对检测结果的影响，提高了检测的客观性和可重复性。上海绵羊精子分析W.H.O 4
检查具备条件
受检者，经历一段经常排精过程后，禁房事5－7天（上次排精到取标本间隔时间至少不得少于100小时）； [1]备大口有盖清洁干燥容器一个，以**方式获取精液，一次全部射入容器，盖上盖，记录标本离体时间； 贴身保温，30分钟内送到化验室，并向检验员提供标本取出时间。 精液常规观察：精液总容量（毫升），精子活动情况，精子密度（个/毫升），精液液化时间（标本取出到精液液化的时间），不动精子（个/高倍视野）等。见不动精子，须染色方可区分：不活动的精子、死精子、未成熟精子等。找不到精子必须离心后检验，仍然找不到精子；方可报告无精。经三次取样化验，结果仍然找不到精子方可确认无精子症。 美国水生动物精子分析精子动力分析CASA系统主要用于精子动力学的分析，可以评估精子的浓度、活力等参数。
精液显微镜检查
精子计数：正常人精子计数为0．6×1012～1．5×0.012/L，相当于一次排出的精子总数为400×106～600×106。当精子计数值＜20×106/ml或一次排精总数＜100×106为精子减少，超过致孕极限而导致不育。精液直接涂片或离心沉淀后均未查到精子为无精症。见于先天性睾丸发育不全、畸形或后天睾丸损伤和萎缩(如睾丸结核、炎症、淋病、垂体或肾上腺功能异常的内分泌性疾病等)、输精管阻塞或是先天性输精管及精囊缺陷，是导致少精或无精的重要原因，也是导致不育的重要原因。检查有无精子也是检查输精管结扎术的效果观察。结扎六周后，连续检查无精子，说明手术成功，如果结扎两个月后，精液中仍有精子，说明手术不成功。
采集精液前5～7天内必须停止性生活，并且不得有**、梦遗等情况，还应禁烟戒酒，忌服对生精功能有影响的药物等。采取精液时间以晨起为佳，采精前用温水将双手、**，尤其是**洗净。可采用**法或电动按摩**法引起排精。精液的排出具有一定顺序，开头部分来自前列腺、附睾及壶腹，伴有大量精子，***部分来自精囊，故应收集整份精液，不要遗漏任何部分，尤其是开头部分。正因为易丢失精液的***部分,故不能用体外**法收集精液。盛精液的容器应干净、无菌、干燥，采精前容器的温度应与室温相同；瓶子不应过大，但瓶口不应过小，以免将精液射出瓶外；还应贴上标签，记录姓名及取精时间。在冷天应将精液标本保温，放置在贴身内衣袋中，不可倾斜或倒置，尽可能在1小时内送到实验室。不同品牌CASA分析的结果差异较大，因此，更高效精确的精液质量检测系统对促进男科学发展具有重要的意义。
二、生化及免疫学检验：5、精浆肉碱测定【正常参考值】浓度为239.56±l05.59umol/L。【临床意义】精浆肉碱测定精浆中的肉碱主要由附睾分泌，其次是精囊。精浆中肉碱分为游离肉碱和乙酰肉碱二种，附睾中含高浓度的肉碱，主要与精子在附睾成熟时所需的能量来源有关。现认为精浆肉碱含量和果糖含量的变化，常反映附睾、精囊的功能。精浆肉碱及果糖含量正常，表明附睾、精囊功能正常。当肉碱含量高于正常的50%，而果糖含量降低，则提示精囊功能障碍，附睾功能正常；精浆肉碱约为正常含量的50%左右，果糖含量正常，说明附睾功能障碍，精囊功能正常；而肉碱急剧下降，果糖含量亦减少，表示精囊、附睾功能均发生障碍。6、抗精子抗体(AsAb)测定【正常参考值】阴性。【临床意义】AsAb检测对不育原因检查有重要临床意义。存在于血清或生殖道分泌液中的AsAb，可抑制精子的活动，干扰精子的运行，阻碍精子穿透及精卵结合，使受精发生障碍。即使已经受精，也可能影响发育中的胚胎，造成免疫性流产。不育夫妇AsAb阳性者占25%-30%，当精子输出管道受阻、睾丸损伤、炎症、附睾等生殖系***时，系精子外逸而产生的自身抗体。Hamilton Thorne精子分析仪具有高度的可靠性和稳定性，能够长时间稳定运行，保证数据的准确性和可重复性。美国水生动物精子分析精子动力分析
HAMILTON THORNE精子分析仪可分析参数，前向性（STR）：平均路径的直线性。上海绵羊精子分析W.H.O 4
CASA精子运动速度和运动轨迹特征主要参数有：①轨迹速度（VCL）：也称曲线速度，即精子头部沿其实际行走曲线的运动速度。②平均路径速度（VAP）：精子头沿其空间平均轨迹的运动速度，这种平均轨迹是计算机将精子运动的实际轨迹平均后计算出来的，可因不同型号的仪器而有所改变。③直线运动速度（VSL）：也称前向运动速度，即精子头部直线移动距离的速度。④直线性（LIN）：也称线性度，为精子运动曲线的直线分离度，即VSL/VCL。⑤精子侧摆幅度（ALH）：精子头实际运动轨迹对平均路径的侧摆幅度，可以是平均值，也可以是最大值。不同型号的CASA系统由于计算方法不一致，因此相互之间不可直接比较。⑥前向性（STR）：也称直线性，计算公式为VSL/VAP，亦即精子运动平均路径的直线分离度。⑦摆动性（WOB）：精子头沿其实际运动轨迹的空间平均路径摆动的尺度，计算公式为VAP/VCL。⑧鞭打频率（BCF）：也称摆动频率，即精子头部跨越其平均路径的频率。⑨平均移动角度（MAD）：精子头部沿其运动轨迹瞬间转折角度的时间平均值。⑩运动精子密度：每毫升精液中VAP>0μm/s的精子数。上海绵羊精子分析W.H.O 4
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