与IdeS不同,Genovis的GingisREX(RgpB)是一种精氨酸特异性蛋白酶,可消化精氨酸残基的C末端蛋白质,包括难以与其他酶消化的Arg-Pro键。该酶可用于肽图分析、从头肽测序和翻译后修饰分析。精氨酸残基的特异性C-末端消化;在其他困难的精氨酸-脯氨酸序列中可靠消化;产生更长的肽-提高序列覆盖率。GingisREX是一种半胱氨酸蛋白酶,可特异性地消化肽键C末端到精氨酸残基,包括与脯氨酸相连的精氨酸。半胱氨酸是酶活性所必需的。与胰蛋白酶消化相比,可生成更长的肽,胰蛋白酶消化可以通过高分辨率质谱进行分离和鉴定。这为自下而上方法的样品制备提供了更多选择,以实现替代的酶解曲线和更高的序列覆盖率。GingisREX在赖氨酸上没有活性,通常使用Arg-C观察到。该酶在5.0-9.0的宽pH值范围内具有活性,它需要半胱氨酸并被盐酸胍抑制。该酶是从牙龈卟啉单胞菌中纯化的。GlySERIAS酶能够分离多功能融合蛋白的各个结构域,以促进表征并增加对这些分子的理解。福建GingisREXIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶

与IdeS不同,Genovis的GlySERIAS是一种独特的酶,可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白连接子,例如Gly4Ser和GlyxSery(GS)以及聚甘氨酸(G)接头。该酶能够分离多功能融合蛋白的各个结构域,以促进表征并增加对这些分子的理解。融合蛋白的中级分析既可以降低整体样品的复杂性,又可以对翻译后修饰进行结构域特异性鉴定和监测。为了改善连接子的去除,Genovis建议使用GlySERIASImmobilized。对于连接子表征,我们推荐GlySERIAS冻干。具有柔性接头的独特酶消化融合蛋白;中级方法可降低融合蛋白表征的复杂性;复杂融合蛋白的可靠且可重复的消化。Genovis的GlySERIAS酶切由甘氨酸或甘氨酸和丝氨酸残基的重复序列组成的柔性连接子。该酶在天然反应条件下具有活性,能够对复杂的融合蛋白进行中级表征。连接子区域同时在多个位点被消化,导致先前连接的组分分离。活性发生在pH7.6下,孵育时间可以根据所需的产物而变化。GlySERIAS是从噬菌体K克隆而来的,在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签,分子量为18kDa。福建GingisREXIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶有一种检测FabRICATOR(IdeS蛋白酶)酶的方法。了解有关山羊多克隆抗体 Anti-FabRICATOR 的更多信息。

Genovis的FabRICATOR(IdeS)是一种独特的酶,可在铰链区域下方的特定位点消化IgG,产生均匀的F(ab')2和Fc/2片段。除IgG外,没有其他底物是已知的。IgG在30分钟内消化,如果孵育时间延长,则不存在过度消化的风险。由于FabRICATOR在生理反应条件下消化IgG,因此保留了免疫反应性。在37°C下获得良好的活性,但也可以在室温下使用较长的反应时间进行消解。FabRICATOR可消化人类的所有亚类以及猴子、兔子和绵羊IgG的某些亚类。它对小鼠IgG2a和IgG3的活性有限-为了消化这些抗体物种,我们建议使用FabRICATORZ。FabRICATOR是从化脓性链球菌克隆而来的,并在大肠杆菌中表达。该酶含有His标签,分子量为37725Da。FabRICATOR是IdeS的重组修饰形式,由GenovisAB开发,用于需要高标准和一致性的生物技术应用。有一种检测FabRICATOR酶的方法。了解有关山羊多克隆抗体Anti-FabRICATOR的更多信息。
与IdeS不同,融合蛋白是通过将两种或多种蛋白质或肽的功能组合成一个量身定制的分子来创造的,以专门应对挑战。连接此类蛋白质或肽结构域的常见方法是包含柔性连接子。这些连接子通常富含甘氨酸,例如甘氨酸残基(G),或甘氨酸残基散布丝氨酸残基(GS)以形成重复序列。这为连接子提供了足够的灵活性,不会干扰连接蛋白质结构域的功能。然而,这些新模式带来了新的分析挑战,需要新的工具来促进表征和产品质量监测。中级分析已成为分析单克隆抗体疗法的标准方法,涉及将分子消化成几个定义的亚基。它们足够小,可以获得高质量的质谱图,并为产品质量属性提供特定领域的信息。由于G和GS连接子对常见蛋白酶的降解具有抗性,因此很难分离结构域以进行深入分析。因此,Genovis开发了GlySERIAS,不同于IdeS酶,一种消化柔性富含甘氨酸的连接子的酶。GlySERIAS可以分离不同的功能域,并实现对融合蛋白、多特异性抗体和含有富含甘氨酸的连接子的各种mAb片段进行详细表征的中级方法。IgASAP Sub1 的消化位点位于该扩展区域,使IgASAP酶具有 IgA1 特异性。

Genovis的FabRICATOR(IdeS)酶 可用于 IgG 的所有人类亚类以及人源化和嵌合 IgG。该酶对其他物种的 IgG 也有活性,包括来自大鼠、猴子、兔子和绵羊的某些类别的 IgG。因此,FabRICATOR的高特异性在某些情况下会使其对铰链区域的突变敏感,并损害酶活性。来自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成,与 FabRICATOR 相比,FabRICATOR Z 在消化这些 IgG 方面具有更高的效率。然而,小鼠 IgG1 在铰链下方具有不同的序列,并且不被 FabRICATOR Z 消化。对于这种抗体种类,FabULOUS 和 FabULOUS Fab 试剂盒可用于制备 Fab 片段。这正是您使用FabRICATOR(IdeS蛋白酶)可以得到的。重庆GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶
有效消化,适用于灵敏的体内或基于细胞的检测。福建GingisREXIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶
其他基于 IgG 的生物制药需要仔细表征和监测关键质量属性,例如氧化、糖基化和其他翻译后修饰。与抗体的克隆选择、工艺开发和稳定性研究相关的大量样品通常通过液相色谱质谱 (LC-MS) 进行分析。然而,在LC-MS之前进行足够规模的样品制备通常具有挑战性。为了解决样品制备的挑战,Genovis将半胱氨酸蛋白酶FabRICATOR(IdeS)固定在磁性琼脂糖珠上,现在称为FabRICATOR MagIC。FabRICATOR固定在磁珠上,可同时快速自动消化多种抗体,促进中级表征工作流程。Genovis的FabRICATOR MagIC 如何以较少的用户交互减少实验和操作时间,降低样品处理错误的风险,同时提高通量。福建GingisREXIdeS蛋白酶IgG特异性蛋白酶
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