我们展示了使用两种蛋白作为底物的OmniGLYZOR的性能。依那西普是一种 Fc 融合蛋白，含有 TNFα 受体的胞外结构域。该结构域用 2 个 N-糖和 8-11 个 1 个具有不同程度唾液酸化的 O-聚糖修饰。在 37°C 下将这种重糖基化蛋白在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小时，可完全去除所有 N-和 O-糖，如中级 LC-MS 分析所示。促红xibao生成素 （EPO） 是一种携带 3 个 N-聚糖和 1 个he心 1 个 O-聚糖的小蛋白质，其总质量的近 40% 由聚糖组成。O-连接聚糖通常存在于蛋白质的暴露位置，因为它们在蛋白质折叠发生后附着。只有负责其合成的糖基转移酶才能接触到这些暴露的位点。GlycOCATCH的应用包括O糖蛋白和肽的特异性富集或去除、糖组学、复杂样品的研究和生物制药的表征。吉林用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis
α连接的Genovis的GalNAcs的水解：GalNAcEXO 是一种 α-N-乙酰半乳糖胺苷酶，可有效水解糖蛋白上的末端 GalNAc 残基。与丝氨酸或苏氨酸连接的 GalNAc（称为 Tn 抗原）被 GalNAcEXO 快速有效地水解，并且该酶还在 α1-3 连接的末端 GalNAcs 上显示出活性。Genovis的GalNAcEXO 是一种外α-N-乙酰半乳糖胺酶，用于有效水解与糖蛋白（Tn 抗原）中的丝氨酸或苏氨酸残基相连的 α-N-乙酰半乳糖胺 （GalNAc）。该酶还在 α1-3 连接的末端 GalNAc 上显示活性。GalNAcEXO 在天然条件下水解糖蛋白上的 GalNAc，在 pH 值 6.0 至 7.6 范围内具有高度活性。北京PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究OmniGLYZOR特点：与LC-MS兼容；完全去除聚糖，改进蛋白的分析；
Genovis的ImpaRATOR™ 和 OpeRATOR® - 两种协同的作用：O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化区域O-聚糖位点的覆盖率（图3）。使用OpeRATOR鉴定对应于所有13个O-聚糖位点的肽，而使用ImpaRATOR只能明确鉴定10个位点。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR （1） 具有更具选择性的氨基酸序列偏好，此处由 S186 和 T245 位点缺乏消化来表明。此外，ImpaRATOR 在两个相邻的 O-糖基化氨基酸之间显示出有限的裂解，如 S213 位点酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位点酶解肽的低强度所证明的那样。在OpeRATOR酶解样品（T184-S199和T200-H204;图2b和d），而在ImpaRATOR消化的样品中，具有漏裂的相应肽（S184-H204）的强度更高。 虽然OpeRATOR显示出更高的O-聚糖位点覆盖率，但使用ImpaRATOR进行消化可以表征O-聚糖结构，包括唾液酸化物种。例如，条形图插入显示了两种糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖种类。这应该与使用OpeRATOR的消化进行比较，在OpeRATOR中，必须去除唾液酸才能产生酶活性，这意味着有关唾液酸化的信息丢失。总而言之，ImpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有关聚糖组成和 O-聚糖位点的完整信息。
C1抑制剂的去糖基化：在O-糖基化生物制药的生产过程中，由于he心GalNAc残基的加工不完全，可能会出现Tn抗原。这表现为具有 203 Da HexNAc 单位差异的重复质量位移。为了确认 Tn 抗原的存在，可以应用以下工作流程，此处在重度（26 个位点）O-糖基化 C1 抑制剂上演示。首先，使用PNGaseF修剪糖蛋白的N-糖，使用Genovis的OglyZOR和SialEXO修剪he心1 O-糖。依那西普的磷性能测试 ：依那西普是另一种具有挑战性的生物制药模型分子，携带 13 个 O-聚糖位点，其中平均 9 至 10 个位点被占用。GalactEXO在天然条件下水解糖蛋白，并在5.5至7.5的宽pH值范围内显示活性。
GalactEXO中的酶来源于Akkermansia muciniphila，并在大肠杆菌中表达。GalactEXO由两种半乳糖苷酶组成，均带有His标签，组分的分子量为87 kDa和109 kDa。用于水解糖蛋白上β1-3,4-连接半乳糖的冻干酶。Genovis的GalactEXO 冻干剂以冻干粉的形式提供，装在 2000 单位小瓶中，用于在 2 mg 糖蛋白上水解 β1-3,4-连接的半乳糖。1. 用于方法开发的灵活格式；2. 可以结合酶以提高效率； 3. 适用于自动化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可！将混合物加载到GlycOCATCH上，洗涤树脂，并用8M尿素洗脱结合的肽。纯化后，在RP-LC-MS上分离样品。数据显示，糖苷酸肽的选择性纯化，携带he心1-O-聚糖。IgA 特异性 O-糖肽富集：IgA 抗体包含 N-连接的糖基化和重度 O-糖基化的铰链区域。胰蛋白酶消化IgA后，将肽和genovis 的SialEXO的混合物加载到GlycOCATCH树脂上，并用PBS和离心洗涤。用 8 M 尿素洗脱显示预期的 O-糖基化铰链肽富集，具有不同程度的糖基化。用于糖蛋白的去氟糖基化，而不会用酶污染z终制剂。云南冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis
现O-糖基化药有Tn抗原，定量he心 GalNAc 水平，减少了异质性。吉林用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis
ImpaRATOR 是一种 O-聚糖依赖性蛋白酶，可催化糖蛋白和糖肽中与糖基化丝氨酸或苏氨酸残基相邻的肽键的水解。它切割用粘蛋白型O-聚糖修饰的丝氨酸或苏氨酸残基的N-末端，包括唾液酸化物种。粘蛋白型O-聚糖是ImpaRAT活性所必需的，该酶不会消化未修饰的丝氨酸或苏氨酸残基，也不会在糖蛋白的N-糖基化位点。该酶接受 O-聚糖结构，包括唾液酸化he心 1 和he心 2 结构以及 Tn 抗原。Genovis的ImpaRATOR 来源于铜绿假单胞菌，在大肠杆菌中表达。该酶含有 His 标签，分子量为 97 kDa。吉林用于自动化系统的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis
对Genovis的ImpaRATOR处理的样品的分析表明，ImpaRATOR很好地消化了所有三种底物...
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