外泌体的精制磁珠法富集精制外泌体:300μg样品(相当于300μg总蛋白)用含有5μg anti-CD63抗体的溶液稀释,与protein A/G磁珠共孵育1hr,漂洗后用0.2M glycine洗脱。如果要先将抗体偶联在磁珠上(以避免抗体洗脱下来对外泌体的干扰),请参考默克磁珠操作说明书。(Protocol C - Antibody Crosslinking Using Bis(sulfosuccinimidyl) suberate (BS3))。推荐使用试剂目录号信息:cat# CBL553t 和cat# OP171以及LSKMAGAG02。 默克已经建立了基于“微滤+超滤”的外泌体制备操作标准,相较于需要昂贵的设备及繁琐操作的超速密度梯度离心,用实验室常见的工具解决外泌体制备的高大上问题,真是惠而不费,不亦乐乎?一个好的超滤浓缩管代理销售需要具备哪些特点您知道吗?宝山区离心浓缩管联系方式
Amicon® Pro纯化超滤管简明操作指南 亲和纯化 用于纯化GST•Tag,His•Tag等重组表达蛋白及抗体,适合~0.5 mL裂解液操作 6次低速离心,总耗时~100分钟(含65分钟孵育时间) 1. 在Amicon® Pro上样池中加入200μL亲和纯化树脂(50%悬浊液)和1.5 mL漂洗缓冲液。 1,000×g离心1 min。 2. 加入0.5 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h,其间可温和搅动促进结合。 3. 1,000×g离心1 min 以去除未结合杂质。 4. 加入1.5 mL漂洗缓冲液,1,000×g离心1 min。 外泌体用于细胞学或动物实验前的无菌处理 已经经过上述方法制备的外泌体在进行细胞或动物实验之前还需进行一步除菌过滤,这个时候考虑到得率,应该采用离心法处理,以减少过滤时的外泌体样品损失。 超滤方法纯化具体操作步骤举例 Amicon® Ultra-15 超滤管 (10 kDa MWCO) 用Steriflip®真空抽滤对样品进行澄清[目录号SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]浦东新区超滤浓缩管联系人上海超滤浓缩管代理销售哪家比较好?
超滤(UF)常用于分离溶液中极其微小的颗粒和不溶分子。虽然分离效果受到包括化学性质、电荷等多种因素影响,这种方法主要还是以分子大小为**基本的考虑。超滤膜截留1-1000kDa(MW)的分子,盐和水等小分子会透过,因此在大分子样品处理中得到了应用。胶状或微粒状物质也能够被截留。UF膜既可以用于透过样品也用于保留样品的纯化。样品***小于膜孔径,则经过膜处理可以达到除热源、澄清和与大分子污染物的分离的效果。如果目的分子远远大于膜孔径,膜处理则可以将小分子污染物去除而目的分子被浓缩。超滤方法相比沉淀法对于样品更温和,没有发生容易导致生物大分子失活的相变,而且在浓缩的同时可以完成对溶质的除盐。超滤的应用不限于蛋白样品的操作,也常用于核酸样品制备,包括分子克隆和质粒纯化。DNA和RNA样品起始浓度低至5ng/mL也可以被高效地在数分钟内被浓缩,回收率达到99%以上。
特别推荐应用(提供实验报告作为参考) Microcon®超滤管: Microcon®PCR 级超滤管: • 法医鉴定分析的DNA样品制备 • 生物大分子样品浓缩、脱盐及缓冲液置换 • 体外合成mRNA的纯化 • 以人mRNA或总RNA制备荧光DNA探针 • 游离标记物的去除 • 纳克级核酸的定量回收及大片段DNA完整性研究 • 替代乙醇沉淀,离心法高效浓缩基因组DNA 应用指南 典型应用 肽及生长因子浓缩 蛋白浓缩与脱盐 电泳等操作前的蛋白样品浓缩 HPLC前去除蛋白 组织培养抽提物和细胞裂解液中大分子成分的纯化 生物样本浓缩(抗原,抗体,酶等) 从含有SDS(或无SDS)的缓冲液中浓缩gDNA 核酸浓缩与脱盐(单链或双链核酸) 去除标记核苷酸 去除标记氨基酸 从扩增的DNA产物中去除引物 克隆前去除连接序列(linker)益启生物公司作为上海一家专业从事超滤浓缩管代理销售。
核苷酸截留分子量(NCO) 超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的,适合各种蛋白研究,但在核酸 和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏 过,相对于球形蛋白需要更致密的膜(截留分子量更小)。所以选择 滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。 浓差极化 浓差极化实质是溶质累积在膜表面造成的堵塞,产生除了膜本身截留分 子量以外的过滤限制。当溶质浓度较高时,会形成相当于第二层滤膜作 用的胶体层,干扰分子通过滤膜,同时降低流速。pH 值、缓冲液的成分 也会影响目的分子的状态而使浓差极化现象加剧或减轻。超滤浓缩管的优缺点您知道吗?浦东新区默克0.5ml超滤浓缩管一级代理
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默克密理博 Amicon® Ultra 离心式超滤管因其完美的设计,一经推出即成为生物样品操作的行业头牌产品。不论是蛋白、核酸、病-毒-或颗粒物,抑或低浓度样品或宝贵的活性样品,Amicon® Ultra 都能兼顾高回收率和操作的方便性及标准化,并满足下游各种应用的要求,使研究者处理样品时倍感轻松。 这款Amicon Ultra 15 mL离心式过滤器借助10 kDa NMWL的滤膜可以进行蛋白浓缩。Amicon Ultra离心式过滤器是蛋白纯化、蛋白浓缩和脱盐的理想工具。 Amicon® Ultra 超滤管的独特优点: 有效浓缩同时保证高的蛋白回收率 1.合理的死体积设计 2.避免样品离干而降低回收率 3.便于估计和控制样品浓缩倍数 4.重复性好,便于样品数据相互比较宝山区离心浓缩管联系方式