蛋白酶用于生成肽，用于质谱分析蛋白质。这些应用包括蛋白质组学和生物制药的深度表征。由于遗漏了切割和样品制备诱导的伪影，传统的蛋白酶并不总是理想的，因此需要具有不同特异性的蛋白酶工具箱。Genovis的GingisREX 是一种精氨酸特异性蛋白酶，可将蛋白质 C 末端消化为精氨酸残基。与胰蛋白酶肽相比，所得肽更长，并可能导致序列覆盖率增加。质谱分析中蛋白酶的特异性对于获得高质量的数据集和避免复杂的数据解释至关重要。作为模型底物，使用胰岛素氧化β链来比较 GingisREX 和 ArgC 的酶特异性。胰岛素氧化β链含有一个精氨酸和一个赖氨酸残基。在RP-HPLC和质谱法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在赖氨酸残基上没有酶活性或其他额外活性，即使在长时间孵育过夜后，酶与底物的比例也很高（1：5）。然而，ArgC在精氨酸残基上显示出主要活性，但在赖氨酸残基上也可以看到酶消化。在酶与底物的比例为 1：20 和过夜孵育下，证明了 ArgC 的额外非特异性活性。在相同条件下，GingisREX未检测到这种情况。数据证实了GingisREX精氨酸残基的特异性活性，并显示使用Arg-C在赖氨酸和其他残基处的非特异性消化。并通过反相LC-MS进行分析，消化产生均匀的Fab和Fc片段。海南GingisKHANIdeS蛋白酶抗体酶切
与IdeS不同，Genovis的GingisREX（RgpB）是一种精氨酸特异性蛋白酶，可消化精氨酸残基的C末端蛋白质，包括难以与其他酶消化的Arg-Pro键。该酶可用于肽图分析、从头肽测序和翻译后修饰分析。精氨酸残基的特异性C-末端消化；在其他困难的精氨酸-脯氨酸序列中可靠消化；产生更长的肽-提高序列覆盖率。GingisREX是一种半胱氨酸蛋白酶，可特异性地消化肽键C末端到精氨酸残基，包括与脯氨酸相连的精氨酸。半胱氨酸是酶活性所必需的。与胰蛋白酶消化相比，可生成更长的肽，胰蛋白酶消化可以通过高分辨率质谱进行分离和鉴定。这为自下而上方法的样品制备提供了更多选择，以实现替代的酶解曲线和更高的序列覆盖率。GingisREX在赖氨酸上没有活性，通常使用Arg-C观察到。该酶在5.0-9.0的宽pH值范围内具有活性，它需要半胱氨酸并被盐酸胍抑制。该酶是从牙龈卟啉单胞菌中纯化的。河南IdeS蛋白酶蛋白组学Genovis 酶产品，被世界各地的科学家使用，创新的产品形式促进了生物药物的开发和质量控制。
大多数zhiliao性抗体都携带人IgG1骨架，双特异性和多特异性形式的开发正在迅速增加。此类抗体的分析需要特异性酶来表征特性，例如单价结合、二硫键扰乱和配对Fc糖基化。传统方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化，这需要优化以极大限度地减少过度消化并获得足够的产量。Genovis的FabDELLO与IdeS酶具有不同的特异性，它在铰链上方的单个位点消化人IgG1，并产生完整的Fab和Fc片段。为了证明FabDELLO的特异性活性，通过非还原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的选择。所有底物均实现了完全消化，包括具有其他困难的LALA和LFLE突变的IgG1。FabDELLO酶在底物上的精确和有效性能验证了其在生物制药开发中的用途。
为什么客户想在他们的工作试用Genovis的FabRICATOR（IdeS）。FabRICATOR的高特异性(在铰链下方有单个消化位点)以及它对IgG种和亚类表现出活性的事实使其成为高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大优势是速度。在大多数IgG上，您可以在短短30分钟内生成F(ab’)2和Fc/2片段，这一速度简化了方法开发，并允许快速有效的中层表征，使客户能够在不比做完整质量实验长太多的时间内获得更多关于分子的信息。Genovis发现更多的缓冲液与溶液中的FabRICATOR消解相容（更多信息）。Genovis已经测试了PBS和150mM醋酸铵，pH7，结果良好。并且应该也适用于FabRICATORHPLC。然而，缓冲液的离子强度会影响抗体片段在FabRICATORHPLC（IdeS）色谱柱上的保留，并且IgG1亚基需要至少100-150mM盐才能洗脱为单个窄峰。其他IgG亚类或融合蛋白可能需要对缓冲液组成进行一些优化。该酶在pH 值范围为 5.0 至 9.0 时显示出活性。
与IdeS不同，Genovis的FabULOUS（SpeB）是一种半胱氨酸蛋白酶，可在来自多个不同物种和亚类的IgG的铰链区域消化，产生Fab和Fc片段。人、小鼠、大鼠、山羊和绵羊的IgG被FabULOUS消化，产生Fab和Fc片段。人IgG1的主要消化位点是......KTHT...例如，制备的Fab片段可用于亲和力研究、Fab糖基化研究和结构研究。对来自多个物种和亚类的IgG有活性–上铰链区域的消化物；快速-在一小时内生成Fab和Fc片段；有效消化小鼠IgG1。FabULOUS来源于化脓性链球菌，在大肠杆菌中表达。FabULOUS的分子量为29kDa，该酶含有His标签。来自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成。山东IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白组学
Genovis提供的IgASAP Sub1+2 在铰链上方的一个特定位点消化人 IgA1 和 IgA2m1，产生完整且均匀的 Fab 和 Fc 片段。海南GingisKHANIdeS蛋白酶抗体酶切
大多数zhiliao抗体携带人 IgG1 骨架，双特异性或多特异性形式的开发正在迅速增加。此类抗体的分析需要特异性酶来表征特性，例如单价结合、二硫键扰乱和配对 Fc 糖基化。传统方案包括使用木瓜蛋白酶和 Lys-C 的酶消化，这需要优化以大限度地减少过度消化并获得足够的产量。Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA （IgdE） 在铰链上方的一个特定位点消化人 IgG1，以产生完整的 Fab 和 Fc 片段。该酶在大多数人IgG1 上也具有活性，其中铰链区域以下的突变已被引入。为了证明FabALACTICA的性能，我们消化了不同的人IgG1抗体，并使用RP-HPLC分析了所得片段。用FabALACTICA消化后观察到的定义峰显示了不同人IgG1抗体的均质片段生成和强大的酶性能。FabALACTICA 酶也可用于生成完整的 Fc 片段。海南GingisKHANIdeS蛋白酶抗体酶切
