Amicon® Pro纯化超滤管简明操作指南 亲和纯化 用于纯化GST•Tag，His•Tag等重组表达蛋白及抗体，适合～0.5 mL裂解液操作 6次低速离心，总耗时~100分钟（含65分钟孵育时间） 1. 在Amicon® Pro上样池中加入200μL亲和纯化树脂（50%悬浊液）和1.5 mL漂洗缓冲液。 1,000×g离心1 min。 2. 加入0.5 mL样品并与树脂吸打混匀。孵育1 h，其间可温和搅动促进结合。 3. 1,000×g离心1 min 以去除未结合杂质。 4. 加入1.5 mL漂洗缓冲液，1,000×g离心1 min。 外泌体用于细胞学或动物实验前的无菌处理 已经经过上述方法制备的外泌体在进行细胞或动物实验之前还需进行一步除菌过滤，这个时候考虑到得率，应该采用离心法处理，以减少过滤时的外泌体样品损失。 超滤方法纯化具体操作步骤举例 Amicon® Ultra-15 超滤管 (10 kDa MWCO) 用Steriflip®真空抽滤对样品进行澄清[目录号SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]益启生物公司专业从事超滤浓缩管代理销售。杨浦区默克离心浓缩管联系人
超滤（UF）常用于分离溶液中极其微小的颗粒和不溶分子。虽然分离效果受到包括化学性质、电荷等多种因素影响，这种方法主要还是以分子大小为**基本的考虑。超滤膜截留1-1000kDa（MW）的分子，盐和水等小分子会透过，因此在大分子样品处理中得到了应用。胶状或微粒状物质也能够被截留。UF膜既可以用于透过样品也用于保留样品的纯化。样品***小于膜孔径，则经过膜处理可以达到除热源、澄清和与大分子污染物的分离的效果。如果目的分子远远大于膜孔径，膜处理则可以将小分子污染物去除而目的分子被浓缩。超滤方法相比沉淀法对于样品更温和，没有发生容易导致生物大分子失活的相变，而且在浓缩的同时可以完成对溶质的除盐。超滤的应用不限于蛋白样品的操作，也常用于核酸样品制备，包括分子克隆和质粒纯化。DNA和RNA样品起始浓度低至5ng/mL也可以被高效地在数分钟内被浓缩，回收率达到99%以上。杨浦区默克离心浓缩管联系人超滤浓缩管应用领域你知道吗。
对于慢***推荐Amicon® Ultra 100kDa; 对于腺***推荐Amicon® Ultra 50kDa。具体的操作步骤可以参考***浓缩纯化试剂盒FTLV00003和FTAV00003的产品使用说明书。另提供AAV（腺相关***）的制备方法供参考。 去污剂因其独特的性质，当浓度大于临界微团浓度（Critical Micelle Concentration, CMC）时，去污剂分子会聚集形成微团而改变分子构象，这有可能会影响去污剂的去除效果。 Amicon® Ultra超滤膜含有微量甘油。如果此成分干扰分析，可用缓冲液或Milli-Q®水预清洗。如果干扰仍然存在，用0.1 N NaOH清洗，然后用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。
首先，Amicon® Ultra超滤管的蛋白比较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次，如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因： 1）如果目的样本在滤过液中，那么请排查： a）是否选择了合适截留分子量的超滤管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？ b）使用的离心力是否是在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。 c）离心机**近是否有校准过？ d）是否***尝试这个蛋白？超滤浓缩管服务电话是多少呢。
Millipore超滤浓缩管设有反转离心回收设计使蛋白样品，特别是小体积样品回收，避免吸头吸取造成的样品丢失或操作错误； 其中0.5mL、2mL 和 70mL 超滤管设计为反转回收模式样品吸附损失小； 合理的死体积设计，避免样品离干而降低回收率； 能兼顾高回收率和操作的方便性及标准化，并满足下游各种应用的要求，使研究者处理样品时倍感轻松。 有效浓缩同时保证高的蛋白回收率 设计精巧、紧凑，一体化结构确保不会发生渗漏，即使是极为珍贵的样品也能非常放心地操作。 上海超滤浓缩管代理销售推荐益启生物公司。普陀区默克离心浓缩管代理商
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通量（超滤效率）及其影响因素 超滤过程中需要在速率和回收率之间平衡以期获得比较好的效果。滤膜的 通量的定义是流量除以面积，使用高 NMWL 滤膜可以增加通量，但同时 会降低回收率。选择膜和装置时需要同时考虑截留分子量和通量。而参 与影响通量的因素很多，包括： 压力：较为稀释的蛋白溶液或胶体悬液进行超滤时，流量随着跨膜压力 （TMP）的增大而增加。正压条件下操作，如 Stirred Cell 搅拌式超滤杯， 这种因素影响较为明显。如果极化影响***，通量会达到一个平台，甚 至可能随着压力的增加而降低。杨浦区默克离心浓缩管联系人
