Genovis将固定化酶固定在磁珠上,用于在铰链下方自动消化IgG。FabRICATOR(IdeS)是一种IgG特异性半胱氨酸蛋白酶,可消化铰链下方单个氨基酸位点的抗体,产生均质的F(ab')2和Fc片段。FabRICATORMagIC磁珠含有FabRICATOR固定化酶。这些微球能够在中级表征工作流程中并行快速自动酶解多种抗体。它们专为自动化平台而设计,但在无法实现自动化的情况下,在振动台上的表现同样出色。酶切消解后,样品可直接转移到LC-MS的自动进样器进行快速色谱分析,或转移到其他分析方法进行分析。自动平行抗体酶切和亚基生成允许处理与克隆选择、工艺开发和潜在生物制药稳定性研究相关的大量样品。自动抗体亚基分析可减少操作人员的时间和样品处理错误的风险,并提高通量。FabRICATOR Magic自动平行抗体酶切和亚基生成,用于处理与克隆选择。河南GlySERIASIdeS蛋白酶

与IdeS不同,Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族。IgASAPSub1是一种IgA1特异性酶,可在铰链上方的一个特定位点消化人IgA1,而IgASAPSub1+2特异性消化铰链上方的IgA1和IgA2m1。两种酶都产生完整且均质的Fab和Fc片段。IgASAP酶能够生成完整的单价Fab片段以及IgA的中级分析,从而促进IgA的表征,例如,在疫苗、zhiliao和诊断的开发过程中。独特的酶促工具,可实现IgA的中级表征和质量控制;生成均相的Fab和Fc片段,并保留免疫反应性;高度特异性–人IgA铰链上方的一个消化位点。甘肃GlySERIASIdeS蛋白酶用于生物药研究,如Fc聚糖分析、双特异性抗体、亲和力和亲和力效应和鉴定翻译后修饰等。

与IdeS不同,融合蛋白是通过将两种或多种蛋白质或肽的功能组合成一个量身定制的分子来创造的,以专门应对挑战。连接此类蛋白质或肽结构域的常见方法是包含柔性连接子。这些连接子通常富含甘氨酸,例如甘氨酸残基(G),或甘氨酸残基散布丝氨酸残基(GS)以形成重复序列。这为连接子提供了足够的灵活性,不会干扰连接蛋白质结构域的功能。然而,这些新模式带来了新的分析挑战,需要新的工具来促进表征和产品质量监测。中级分析已成为分析单克隆抗体疗法的标准方法,涉及将分子消化成几个定义的亚基。它们足够小,可以获得高质量的质谱图,并为产品质量属性提供特定领域的信息。由于G和GS连接子对常见蛋白酶的降解具有抗性,因此很难分离结构域以进行深入分析。因此,Genovis开发了GlySERIAS,不同于IdeS酶,一种消化柔性富含甘氨酸的连接子的酶。GlySERIAS可以分离不同的功能域,并实现对融合蛋白、多特异性抗体和含有富含甘氨酸的连接子的各种mAb片段进行详细表征的中级方法。
一些应用(如结合研究)具有高度灵敏度,因此在制备中需要不含残留酶的纯抗体片段。因此,Genovis的 IgG 特异性蛋白酶也以固定化酶提供,可快速轻松地生成均质 F(ab')2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR (IdeS),用于制备来自多种 IgG 的 F(ab')2 和 Fc 片段(对于兔 IgG,请咨询),而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 试剂盒进行处理 。 为了生成和纯化完整的 F(ab')2 和 Fc/2 片段,使用 FabRICATOR Fab2 试剂盒处理曲妥珠单抗,并通过 SDS-page 进行分析。首先,在室温下在FabRICATOR固定化离心柱上消化抗体15分钟,然后进行短离心步骤。在 CaptureSelect ™ 离心柱上纯化 F(ab')2 片段,并通过降低 pH 值,然后立即调整回中性 pH 值,一步洗脱结合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 试剂盒从酶切到收集片段的过程大约需要 1 小时度拉糖肽的连接子中的大量甘氨酸残基为GlySERIAS提供了许多不同的潜在消化位点。

不同于IdeS,Genovis的FabDELLO 是一种蛋白酶,可在铰链上方的单个位点消化人 IgG1,在两小时内产生完整的 Fab 和 Fc 片段,无需还原条件。该酶对具有突变铰链区域的抗体(如 LALA 突变)具有活性,并启用中级 LC-MS 来表征具有突变铰链的抗体的关键质量属性。FabDELLO 在铰链上方的单个位点消化人 IgG1 (...KSCDK / THTCPPCP...),生成完整的 Fab 和 Fc 片段。FabDELLO 是一种赖氨酸特异性蛋白酶。单个消化位点是人 IgG1 的三维结构的结果,使这种赖氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖,则Fc上暴露的赖氨酸处可能会出现额外的消化位点。FabDELLO在天然条件下具有活性,需要钙离子的存在。在37°C和pH 7-8.5下获得良好活性。FabDELLO 是从 Bdellovibrio 细菌克隆而来的,并在大肠杆菌中表达。该酶含有 His 标签,分子量为 32 kDa。Genovis的FabRICATOR MagIC酶解mAb,使用LC-MS进行中级分析。云南FabALACTICAIdeS蛋白酶
FabRICATOR 验证试剂盒应用:简化QC方法验证;批次间变异性评估的理想形式;提高批量放行检测性能的可信度。河南GlySERIASIdeS蛋白酶
Genovis的FabDELLO在铰链上方的单个位点消化人IgG1,并在两小时内生成均质的Fab和Fc片段(Genovis的IdeS在铰链区下方的单个位点进行消化)。生成的片段可用于结晶和高阶结构(HOS)的NMR研究、结合研究等。突变的铰链区域是zhiliao性候选抗体的常见修饰,以降低效应器功能。这些突变可能会影响具有高底物特异性的酶的抗体消化效率。例如,高度特异性的FabRICATOR(IdeS)消化效率对含有常见LALA突变的抗体产生负面影响。FabDELLO作用于人IgG1铰链上方的单个暴露赖氨酸残基,能够对具有突变铰链区域的抗体进行流行的中级LC-MS分析。例如,用FabDELLO消化市售的IgG1risankizumab,在下铰链区域具有LALA突变,并通过反相LC-MS进行分析。消化产生均匀的Fab和Fc片段。用20mMDTT还原片段,用于中级LC-MS分析,发现产生了均相的Fc/2、轻链(LC)和Fd片段。用FabDELLO消化后观察到的定义峰显示出均匀的片段生成和酶的稳健性能。河南GlySERIASIdeS蛋白酶
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