IgA 消化酶的 IgASAP 家族特异性消化血清和分泌型人 IgA 以生成 Fab 和 Fc 片段。IgASAP Sub1 特异性消化人 IgA1，而 IgASAP Sub1+2 同时消化人 IgA1 和 IgA2m1。 Sub1+2 特异性消化铰链上方的 IgA1 和 IgA2m1。两种酶都产生完整且均质的 Fab 和 Fc 片段。为了获得纯和完整的Fab片段，使用Genovis的GingisKHAN Fab Kit进行人IgG1的消化和抗体片段的后续纯化。通过与 GingisKHAN 孵育，然后在 CaptureSelect™ 人 CH1 离心柱上亲和纯化，在曲妥珠单抗上证明了完整的片段生成。样品的酶和Fc部分存在于色谱柱的流通中，Fab很容易通过降低pH洗脱。使用该试剂盒，可以制备 0.5 mg 至 2 mg 人 IgG1 的 Fab 片段。Genovis同时提供IdeS酶的纯化试剂盒。使用GlySERIAS固定化消化融合蛋白得到均质Fc/2。云南FabALACTICAIdeS蛋白酶抗体酶切
Genovis的FabRICATOR是一种半胱氨酸蛋白酶，它对许多不同的物种和IgG亚类都有活性，包括人IgG亚类1-4以及猴子、兔子、大鼠和绵羊IgG的一些亚类。FabRICATOR在铰链下方的单个位点进行消化，生成F(ab’)2和Fc/2子基，可以进一步还原生成Fd’，轻链和F/2子基是必需的。FabRICATOR（IdeS）通过蛋白-蛋白相互作用与目标抗体工作，这说明了它的高特异性。事实上，它在单个位点消化意味着使用FabRICATOR时没有过度消化的风险，其高特异性也意味着相同的消化方案可以作为平台方法应用于许多不同的抗体。FabRICATOR（IdeS）不需要还原条件来获得良好活性，也不需要任何额外的辅助因子，它将在不同生理缓冲中发挥作用。这意味着按照下面的铰链消解，您将生成F(ab’)2和Fc/2片段用于分析或其他应用。上海FabULOUSIdeS蛋白酶抗体酶切Genovis将半胱氨酸蛋白酶FabRICATOR（IdeS）固定在磁性琼脂糖珠上，现在称为FabRICATOR MagIC。
LC-MS中级分析是一种被大众接受的分析方法，用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制药。它有助于理解多种关键质量属性 （CQA），例如糖基化、氧化和 C 端赖氨酸剪切。这种关于翻译后修饰（PTM）的详细知识是生物制药开发和制造所必需的。Genovis的FabRICATOR HPLC酶色谱柱，可快速进行单克隆抗体的柱上酶切，并产生一致的亚基。该色谱柱含有固定化的FabRICATOR（IdeS）酶，可在铰链下方快速且特异性地消化IgG，产生F（ab'）2和Fc片段，而不会出现任何过度消化的风险。为了减少样品处理并为样品制备提供自动化解决方案，FabRICATOR被共价固定在树脂上，并装在适用于HPLC的PEEK色谱柱硬件中。使用FabRICATOR HPLC色谱柱，只需稍作修改，即可使用标准HPLC-MS装置自动生成抗体亚基。然后，FabRICATOR HPLC色谱柱上消解产生的亚基被捕获在在线连接的反相（RP）色谱柱的柱头上。
Genovis提供色谱柱形式的FabRICATOR（IdeS）酶，是在铰链下方对IgG进行柱上消化的固定化酶。Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一种IgG特异性半胱氨酸蛋白酶，可消化铰链下方单个氨基酸位点的抗体，产生均质的F（ab'）2和Fc片段。酶解后，可以使用反相HPLC、质谱或其他分析方法分析片段。抗体消化和亚基生成的自动化使生物反应器的在线监测应用成为可能，例如，作为2D-LC-MS设置的一部分，将反应器直接耦合到MS。这种自动化的抗体亚基分析方法减少了操作人员的时间、样品处理时间并提高了通量。Genovis的IdeS蛋白酶是IgG特异性半胱氨酸蛋白酶。
Genovis的FabRICATOR Fab2 （IdeS）试剂盒可消化兔 IgG，但要在亲和步骤中捕获 Fc 片段，您需要另一种填料，而不是试剂盒中通常包含的 CaptureSelect™ Fc。如果您对处理兔IgG感兴趣，请联系Genovis团队，我们将在FabRICATOR Fab2试剂盒中提供与兔Fc相容的树脂色谱柱。使用FabRICATOR的抗体消化的简单性、速度和可重复性也意味着这种酶可以被用于质量控制应用。 QC方法需要执行简单，易于训练，高度可重复，数据易于分析，这正是您使用FabRICATOR所得到的。 因为它适用于一系列不同的IgG，这也意味着使用FabRICATOR进行QC工作的客户将能够在未来的产品中使用它。 这显示了这种酶在抗体消化中是多么的有效。如Thermo Scientific™ KingFisher™ ；在振动台上也能同样出色地工作。云南GlySERIASIdeS蛋白酶抗体酶切
如FabRICATOR Immobilized，可快速轻松地生成均质 F（ab'）2 和 Fc/2 片段。云南FabALACTICAIdeS蛋白酶抗体酶切
为什么客户想在他们的工作试用Genovis的FabRICATOR（IdeS）。FabRICATOR的高特异性(在铰链下方有单个消化位点)以及它对IgG种和亚类表现出活性的事实使其成为高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大优势是速度。在大多数IgG上，您可以在短短30分钟内生成F(ab’)2和Fc/2片段，这一速度简化了方法开发，并允许快速有效的中层表征，使客户能够在不比做完整质量实验长太多的时间内获得更多关于分子的信息。Genovis发现更多的缓冲液与溶液中的FabRICATOR消解相容（更多信息）。Genovis已经测试了PBS和150mM醋酸铵，pH7，结果良好。并且应该也适用于FabRICATORHPLC。然而，缓冲液的离子强度会影响抗体片段在FabRICATORHPLC（IdeS）色谱柱上的保留，并且IgG1亚基需要至少100-150mM盐才能洗脱为单个窄峰。其他IgG亚类或融合蛋白可能需要对缓冲液组成进行一些优化。云南FabALACTICAIdeS蛋白酶抗体酶切
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