核酸酶活性受到很多因素影响,如盐浓度、pH、底物、温度等。因此,不同客户、不同项目中核酸酶的使用条件都不一样。目前,生物制药行业对Benonase全能核酸酶的使用比较熟悉,如生理盐或低盐浓度、脱盐操作等。对于AdV/AAV等项目,使用SAN HQ高盐核酸酶替代Benzonase时,只需提高反应体系总盐浓度到400mM-500mM即可,温度、Mg2+浓度等条件不用做任何调整,同样酶量的SAN HQ对宿主细胞DNA(HCD)的去除效果更好、病毒载体得率更高。经过工艺优化后,可以将SAN HQ高盐核酸酶的用量减少到原来的1/3-1/4,且HCD去除效果及产品得率更高。SAN HQ高盐核酸酶的生产用原辅料是Non-animal和Non-plant来源的。福建高盐条件高盐核酸酶

ArcticZymes Technologies提供独特特性的盐活性核酸酶(Salt Active Nucleases,SANs)系列产品,主要包含SAN HQ高盐核酸酶和M-SAN HQ中盐核酸酶。这两款酶都是非特异核酸内切酶,跟Benzonase一样能高效降解任何形式(双链、单链、线状、环状)的DNA和RNA;都来自于深海microbes,通过Pichia pastoris发酵生产得到。这两款酶的区别在于发挥酶活的适宜盐浓度不同,——M-SAN HQ中盐核酸酶的适宜盐浓度在175mM-250mM,而SAN HQ高盐核酸酶的适宜盐浓度在400mM-600mM。广东ArcticZymes高盐核酸酶70921-150ArcticZymes致力于提供高质量产品,具有好的批间一致性、稳定可靠的质量。

基因药物是指将外源基因引入靶细胞,纠正或补偿基因缺陷或异常引起的疾病的。这种策略对许多疾病的康复有很大的潜力,包括ai症、神经退行性疾病和心血管疾病。目前已经进行了2000多项基因药物临床试验,大多数载体已被证明是有效和安全的。目前的研究表明,大约64%的基因药物临床试验是为了医治ai症疾病,而最常见的策略是传递抑制cancer生长或杀死cancer的基因。基因药物的关键是使用安全有效的基因传递载体,如病毒载体和非病毒载体。病毒载体是常用的基因导入的方式之一。而腺病毒的载体由于转基因效率高,不受靶细胞是否分裂的限制,容易制备高滴度的病毒载体,在基因药物和免疫领域有更多的应用。
AAV病毒滴度通常分为物理滴度和infection滴度。物理滴度一般是指基因组滴度或者衣壳滴度。在测定AAV的含量时,通常采用基因组滴度或者衣壳滴度作为单位,其中基因组滴度为携带基因组的AAV的浓度,衣壳滴度为AAV物理颗粒的浓度。基因组滴度一般采用qPCR、ddPCR、染料法、UV/Vis等方法来测定;衣壳滴度主要是通过ELISA、HPLC等方法来测定。AAV基因组滴度检测的关键在于尽可能彻底去除AAV衣壳外的HCD残留,减少污染核酸对qPCR或ddPCR的影响。经典方法是加入常规核酸酶(如Dnase I、Benzonase等)消化AAV衣壳外的HCD残留,然后加入Proteinase K破碎病毒衣壳,进行后续检测。经过对比发现,用SAN HQ高盐核酸酶替代常规核酸酶处理AAV病毒,能够更高效去除衣壳外的核酸残留,qPCR或ddPCR结果重复性更高、更稳定。SAN HQ高盐核酸酶在高盐浓度下活性更适,DNA去除效率更高。

杆状病毒表达载体体系Baculovirus/Sf9(Baculovirusexpression vector,BEV),是应用杆状病毒表达载体(BEV)系统infect昆虫细胞Sf9,是一种替代哺乳动物包装细胞系的生产方案。整个系统包含两种BEV,其中一个BEV携带两侧有ITRs的目的基因,另一BEV则携带rep/cap基因。这两种BEV同时infectSf9即可组装AAV。由于杆状病毒具有辅助功能,因此BEV系统与可以稳定表达rep的Sf9细胞相结合,可用于灵活的、高滴度的大规模载体生产。BEV体系安全性好,infection效率高,生产工艺较之sTT更易放大,有更高的体积生产率优势。SAN HQ高盐核酸酶有助于减少了宿主细胞残留DNA的污染,提高了基因药物的安全性。陕西高盐核酸酶70921-202
SAN HQ高盐核酸酶在盐浓度400-650mM条件下活性达到峰值。福建高盐条件高盐核酸酶
氯化铯(CsCl)/碘克沙醇密度梯度离心大概是经典的AAV纯化技术了。这种技术适用于所有血清型且分辨率高,但是因生产工艺很难放大,低通量等缺点阻碍了其在工业中的应用。继密度梯度离心之后,色谱法不断发展,并逐渐成为一种成熟的、主流的方法。色谱法通过载体的净电荷、疏水性、对配体的亲和性、大小以及其他性质来分离并纯化载体。这类技术有诸多的优点:更具可扩展性和成本效益,可多次重复使用,可并行运行或串联运行,还可有效去除非定植剂,这是开发后期的一个关键方面。福建高盐条件高盐核酸酶
细胞基因药物的基因递送有病毒及非病毒两种方式,其中病毒递送更为常用。在病毒递送路径中,腺相关病毒(A...
【详情】通过三质粒瞬转体系生产病毒载体,会引入宿主细胞DNA残留(HCD)、蛋白残留(HCP)、工艺杂质(如...
【详情】基因药物常用的AAV载体有三种生产方法,分别是三质粒瞬转体系、杆状病毒表达载体体系和包装细胞体系。其...
【详情】一般来说,生物生产工艺用的核酸酶以BenzonaseTM(BenzonaseTM是Merck的注册商...
【详情】目前基因药物领域常用的病毒载体有腺病毒、慢病毒、重组腺相关病毒(rAAV)以及逆转录病du等,其中A...
【详情】经典的慢病毒载体(LV)的生产工艺如下,——三质粒系统瞬时转染HEK293细胞系,转染24小时后LV...
【详情】经过多年的经验积累及市场积淀,倍笃生物已组合多条不同产品线,分别满足体外诊断、organoid及干细...
【详情】残留的宿主DNA是生产中产生的杂质,其存在潜在的致瘤性、传染性和免疫原性等风险。相关研究表明,基因的...
【详情】一个美国客户做了对照实验,比较Benzonase和SAN HQ高盐核酸酶纯化病毒载体的效率。实验设计...
【详情】ArcticZymes厂家对盐活性核酸酶系列产品(Salt Active Nucleases,SAN...
【详情】ArcticZymes Technologies成立于20世纪80年代后期,总部位于挪威北部的特罗姆...
【详情】