培养平板培养基是被用于获得微生物纯培养的很常用的固体培养基形式,它是冷却凝固后的固体培养基在无菌培养皿中形成的培养基固体平面,常被简称为培养平板。也叫平面培养基、平皿培养基。平板培养基常用于单孢分离,测定菌丝生长速度,观察菌落的形态,拮抗实验,测定接种空间杂菌数。平板培养基制作方法如下:将培养皿洗净、干燥,使各培养皿盖方向一致,用牛皮纸包好,或放入特制铁罐内,注明皿盖的方向。高压灭菌或干燥灭菌后备用。取刚灭菌后尚未凝固的培养基置于无菌箱或超净工作台内,先左手持三角瓶,右手反转手掌用中指和无名指拨出棉塞或硅胶赛(或不翻转手掌用小指和手掌拨出棉塞),同时将三角瓶转换至右手,而后左手拿平皿,以大拇指和中指将皿盖打开一缝,至瓶口刚好伸人。三角瓶口经火焰烧灼后,倾入灭菌或溶化、冷却至55~60°C的培养基约15mL(勿使瓶口靠在平皿壁上,以免沾染皿壁),迅速盖好皿盖,置于桌上轻轻旋转平皿,使培养基均匀分布于整个平皿底部,冷凝后即为平板培养基。有时凝固后的培养基表面有冷凝水,可将平皿盖打开倒置于37℃温箱,除去冷凝水,否则将影响平板分离培养效果。为防止冷凝水过多,也可将培养基冷却至45~50°C再倒平板。培养基根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基。广西琼脂培养基 培养基制备器
三角培养瓶是细胞培养中的常用耗材,也可用于培养基的配制、混合及储存。利用三角培养瓶制备培养基可以按照以下步骤操作:配料:配方换算→在容器中加入少量水(蒸馏水,自然水)→按照配方称取各种药品(依次加入)→加足所需水量(一药一勺,取药后立即盖上瓶盖)。溶解:淀粉溶解:少量冷水调成糊状。加热溶解,特别是加有琼脂的培养基,一定要煮沸,琼脂的熔解温度95-97℃,且需要边加热边搅拌以防止烧焦。调PH:用1N的盐酸或1N的NaOH把培养基调节到所要求的值。过滤:滤纸或棉花进行过滤。分装:一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。三角培养瓶:若作静置培养,则100ml培养基/250ml的三角培养瓶,很多不能超过150ml培养基/250ml的三角瓶,否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞,造成染菌;若作摇瓶培养,则15-20ml培养基/250ml的三角瓶,保证通气良好。试管分装:液体培养基一般装4-5ml,约试管的1/4高度;固体斜面培养基一般装3-4ml,约试管的1/5高度。广西琼脂培养基 培养基制备器培养平板培养基也叫平面培养基、平皿培养基。
培养基各成份的混合和溶化:培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅,以防有微量铜或铁混入培养基中,使细菌不易生长。好好使用不锈钢锅加热溶化.也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动,以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用,应重新制备。待大部分固体成分溶化后,再用较小火力使所有成分完全溶化.迄至煮沸。如为琼脂培养基,应先用一部分水将琼脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中,因蒸发而丢失的水分,较后必须加以补足。
对LST(月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤)培养基进行灭菌时,有时发酵管内会有气泡。为防止发酵管内产生气泡,可以采取以下几项措施:(1)小倒管浸满培养基(不留气泡)后再加入到盛LST的试管中。(2)灭菌锅关闭放气阀前,将锅内气体排干净。(3)试管塞不要塞得太紧(使用硅胶塞的时候),勿使用橡皮塞。(4)不要过早打开灭菌锅,要等灭菌锅内气体和温度都降到与室温一致或相差不大时再打开灭菌锅。如果以上情况都做到还有气泡,可用水做培养基组的对照试验,若培养基组有气泡,而对照组没有气泡,可确定是培养基自身的原因。培养基制备器盖子和分装孔是采用温度和压力控制的,不能随意打开。
利用三角培养瓶制备培养基:包扎,分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。灭菌,按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。摆斜面,灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放,使其凝固成为一个斜面,约占试管长度的1/2。贮存,培养基在30℃下放置,无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用。培养基是细胞生长的必需营养物质,利用三角培养瓶制备培养基可按照以上步骤操作,在使用前需确保培养基的无菌性,以免影响细胞正常繁殖。固体培养基根据性质又分为固化培养基、非可逆性固化培养基、天然固态培养基、滤膜。江西培养基制备器厂家
全自动培养基制备仪主要特点:保证细菌不被引入容器中。广西琼脂培养基 培养基制备器
杀毒灭菌方式主要有三种类型:⑴高压蒸汽灭菌方式,此方法可用于大多数耐热培养基。⑵煮沸灭菌法方式:此方法可用于含有不耐高温物质的培养基。⑶过滤除菌方式:过滤除菌,采用无菌技术定量添加培养基。血液和可以用无菌技术抽取并加入冷却至约五十度的培养基中。当培养基中含有不耐热物质时可以使用此方法。培养基倒入平板:将灭菌溶化的培养基冷却至五十度后,倒入无菌干燥的培养皿中。微生物培养基制备的温度不能太高,否则培养皿内盖容易形成过多的冷凝水。广西琼脂培养基 培养基制备器
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