芜湖武汉细胞高效转染试剂

转染的注意事项：细胞铺板密度用于转染的较佳细胞密度根据不同的细胞类型或应用而异。一般转染时，贴壁细胞密度为70%-90%，悬浮细胞密度为2×106-4×106细胞/ml时效果较好。确保转染时细胞没有长满或处于静止期。因为转染效率对细胞密度很敏感，所以在不同实验间保持一个基本的传代步骤很重要。铺板细胞数目的增加可以增加转染活性和细胞产量。在三种不同密度进行细胞铺板的比较表明铺板密度较高的，CAT活性也较高。得到较高活性所需的LIPOFECTAMINE试剂的量也相应增加了。这些结果说明，对于转染相同量的DNA所需的较佳阳离子脂质体试剂的量会因细胞密度而异~转染 ，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。芜湖武汉细胞高效转染试剂

细胞转染效率影响因素：1.细胞密度一般来说，当细胞密度达到60%～80%时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。2.细胞生长状态这点非常关键，很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性，应尽量使用适度传代的细胞系，并在不同次实验时保持细胞传代次数的一致性。3.细胞种类不同细胞种类的细胞在做转染时所需要的转染体系是不同的，不能一种体系用在所有类型细胞的转染实验无锡唐山细胞高效转染试剂再通过融合或细胞内吞进入细胞。

细胞转染常用步骤：1.转染试剂的准备①将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。②震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。2.选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。3.将混合液在室温放置10―15分钟。4.吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。5.加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。6.到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时

细胞转染的注意事项：血清A、DNA-阳离子脂质体复合物形成时不能含血清，因为血清会影响复合物的形成。B、一般细胞对无血清培养可以耐受几个小时没问题，转染用的培养液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被认为会降低转染效率，转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。C、对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用营养丰富的无血清培养基，或者在转染培养基中使用血清。对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞，建议使用**转染试剂。有条件的话，可以用无血清培养基代替PBS洗细胞两遍，注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加入液体，然后不要吹吸细胞而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，加了脂质体后，细胞受影响就更大了，死亡细胞会增多加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。

影响转染试验的因素：1.转染试剂跟细胞系不匹配转染试剂跟细胞系也是讲究配合默契的，使用同一种试剂，不同细胞系转染效率通常不同。但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择较适合实验设计的转染试剂。当然，较适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。因为有些细胞系是不稳定的，可能随着培养时间的改变，培养条件的不同，不同的选择压力，可能引起不同的克隆选择。因此就算是同一个细胞系，在不同条件下转染能力的差异可能会很大。在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。珠海细胞高效转染试剂哪家好

在转染过程中是可以使用血清的。芜湖武汉细胞高效转染试剂

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