溶液在膜上的点样量一般情况下为1ul/cm.溶液在膜上的扩散是趋向两端的,喷点上去的是均匀的抗体溶液,但当干燥时线条边缘的干燥速度高于中间,中间的抗体会不断向两边扩散,所以干燥后抗体是向线条的两端聚集的.一般情况下不影响你的试验.如果你发现线条出现两端红,中间淡的现象,就要考虑这个问题了.可以加如上面说的作用物质来解决。从供应商处购买回的膜基本上都是已经优化处理好的,直接点膜就可使用.然而我们还是经常会遇到关于封闭的讨论.我极其反对点膜前封闭的做法. 原因为厂家在生产膜时候,各种配方是混合加入原浆的.而点膜前封闭时要将膜浸泡在封闭液内,必然扰乱了膜内正常的物质分布.由此引发了许多问题,也降低了工作效率. 也有厂家遇到不封闭就无法包被上膜的问题,其实可以通过其他办法来解决,封闭必然是下测。使用PVDF转印膜能够提高产品的附加值。山东Western 印迹转印膜厂家电话
PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。PVDF膜是疏水性的,膜孔径有大有小,随着膜孔径的不断减小,膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。PVDF膜大于20kda的蛋白选用0.45um的膜,小于20kda的蛋白选用0.2um的膜。PVDF膜在使用时需预处理,用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团,使其更容易与带负电的蛋白结合。PVDF膜具有较高的机械强度,是印迹法中的理想固相支持物材料。1、水处理用PVDF膜,分为超滤膜和微滤膜两种,主要用于污水、海水淡化等的前处理,去除大分子、细菌、泥沙等杂质2、户外建筑用PVDF膜,主要用户户外建筑的玻璃、外墙、户外广告牌等的保护,主要是耐老化和耐磨功能3、电池用PVDF膜,包括在燃料电池和锂离子聚合物电池中的隔膜应用。温州透明反光转印膜批发商PVDF转印膜采用的技术先进、工艺独特。
转印膜用于蛋白质和核酸的转移和检测过程,主要分为:正电荷尼龙膜/硝酸纤维素膜/PVDF膜(Positively charged nylon/Nitrocellulose/PVDF membrane)。已知的结合力包括疏水作用力\H键\静电作用力等,确切的结合原理并不明确,主要靠假说来支撑.主要有两种假说:1 首先两者靠静电作用力结合, 然后靠H键和疏水作用来维持长时间结合.2首先两者靠疏水作用结合, 然后靠静电作用来维持长时间结合.两条假说, 都表明其结合过程分为两步, 首先结合和后面长时间结合.由于结合原理的不明确性, 导致在这方面的工作非常依赖实践经验。
硝酸纤维素膜(NC膜)是蛋白印迹实验的标准固相支持物。在低离子转移缓冲液的环境下,大多数带负电荷的蛋白质会与硝酸纤维素膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起,虽然这其中的机制还不是十分清楚,但由于硝酸纤维素膜(NC膜)的这个特性,而且易于封闭非特异性结合,从而得到了普遍的应用。在非离子型的去污剂作用下,结合的蛋白还可以被洗脱下来。根据被转移的蛋白分子量大小,要选择不同孔径的硝酸纤维素膜(NC膜)。因为随着膜孔径的不断减小,膜对低分子量蛋白的结合就越牢固。但是膜孔径如果小于0.1mm,蛋白的转移就很难进行了。膜材料具有较高的韧性和抗拉强度。
如何选择膜?经常会遇到的问题是,我是做什么项目的,我该选择那类膜?这里涉及到一个膜的分类标准问题,一个供应商可能提供这个膜是8um,但另一个供应商告诉你膜是135s的。这之间的区别与联系是什么?um指的是膜孔径,而从上面膜的生产过程,我们可以看出,膜的孔径实际上是没有办法界定的。由于干燥成型等过程的非均一,膜的孔径也是非均一的.膜孔径的说法实际上是沿用了一直以来的一个形象称呼.而以秒为单位的定义为,每4cm膜,水的层析时间是140s.该单位已经越来越被各大厂商所接受,成为了一个通用的比较标准.以下我们将采用s单位来进行交流。换算情况大致为:8um=135s;6um=180s。PVDF转印膜能够保证良好的图案复现性。北京蛋白吸附转印膜品牌
膜材料易于加工和安装。山东Western 印迹转印膜厂家电话
我们并没有那么多选择. 经过使用实践, 各供应商一般都只提供两个型号, 就是135s和180s. 虽然看到有些厂家的产品目录上型号种类繁多,但这两个型号的定货量就占了95%以上, 其他型号供货上也就远不如这两个型号来得顺利. 135s一般用在双抗体夹心法, 180s一般用在竞争法. 你所要做的是,先选择其中的一个型号, 然后比较不同供应商同一个型号的差异, 由于前面说的添加配方与你的试验条件配合的不同,这个差异可能大也可能小. 具体要根据试验结果来确定之后的选择。我个人不建议地毯式的测试不同规格/不同厂家的膜, 这样成本高, 成功的几率也小。山东Western 印迹转印膜厂家电话