哥伦比亚链霉菌

细胞冻存基本方法：（1）细胞：选对数生长期细胞，收集细胞24小时前换液一次。（2）计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达5*106/ml，离心去上清，吸入离心管中。（3）冻存液：先用培养液9份＋DMSO1份配成10%的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。（4）分装：分装入无菌安剖中，每安剖加。（5）封口：用塑料安剖时拧紧瓶口即可；如用火焰封闭安剖口后，仔细检查，定要封严，必要时可浸入蓝色液中观察，为安全起见，把安剖缝入纱布小袋中，以防液氮浸入后，融解时因受热发生伤人；纱袋一端系以线绳，末端扎有小牌，注明：细胞名称，冻存日期，以便日后查找。细胞株(系)的使用，为医学研究和测试工作带来了极大的方便。但细胞的传代是有限制的，长期连续传代的细胞，不仅消耗大量的人力和物力，而且细胞的生长与形态等会有一定退变或转化，因而细胞失去原有的遗传特性，有时还会由于细胞污染而造成传代中断，种子丢失。因此，在实际工作中常需冻存一定数量的细胞，以备替换使用。细胞冷冻与复苏是细胞培养室的常规工作和通用技术。革兰氏阳性菌，可形成内生抗逆芽孢，芽椭圆到柱状，位于菌体**或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。哥伦比亚链霉菌

金霉素链霉菌的培养方法：

培养基选择：金霉素链霉菌可以在多种培养基上生长。常用的培养基包括液体培养基如Tryptic Soy Broth（TSB）和固体培养基如Tryptic Soy Agar（TSA）。此外，为了促进金霉素的产生，可以使用特定的金霉素产生培养基，如金霉素产生培养基（Streptomyces agar）。培养基制备：按照培养基的配方，将所需的培养基粉末加入蒸馏水中，并加热搅拌直至溶解。将溶液分装到无菌培养瓶或无菌培养皿中。菌种接种：从保存的金霉素链霉菌菌种中挑取一小部分，用无菌技术接种到预备的培养基中。可以使用无菌的环针或菌液环扩的方式进行接种。培养条件：将接种后的培养基培养瓶或培养皿置于适当的培养箱中。金霉素链霉菌是革兰氏阳性菌，通常在28-30摄氏度下生长。金霉素的产生通常在一定的培养时间内，可以根据具体要求进行培养时间的调控。观察和维护：在培养过程中，观察金霉素链霉菌的生长情况。金霉素链霉菌形成呈棕色或棕黑色的菌落，可以通过显微镜观察菌丝的形态特征。金霉素提取：如果目的是提取金霉素，可以在培养过程结束后，采取适当的提取方法，如有机溶剂提取或发酵液浓缩等。 荚膜鞘氨醇单胞菌枯草芽孢杆菌具有孢子休眠期、生殖生长期两个生长时期。

刺芹侧耳（杏鲍菇）的培养方法：

培养基准备：准备适合杏鲍菇生长的培养基，常用的培养基包括麦麸、玉米秸秆、木屑等基质。可根据需要添加适当的补充物，如蔗渣、豆粉等。培养基消毒：将培养基加入适当容器中，加入足够的水分，进行消毒处理。可使用高压蒸汽灭菌器或其他合适的方法进行消毒，确保培养基无菌。接种材料准备：可以使用杏鲍菇菌种（种子），这可以从专业菇农或市场购买得到。也可以使用已培养好的母菌进行接种。将菌种保存在无菌条件下，避免污染。接种过程：将培养基倒入适当的容器中，如塑料袋或木箱。培养基的层厚度应适中。将菌种均匀地撒在培养基表面上，或将菌种与培养基充分混合。培养条件：设置适当的培养条件，如温度、湿度和光照。杏鲍菇通常在温度为20-25摄氏度下培养，湿度控制在80-90%之间。对于光照要求，杏鲍菇喜欢半阴暗的环境，可以选择在低光照条件下培养。培养过程：将含有菌种的培养基容器密封，并放置在适当的环境中进行培养。培养时间根据需求而有所不同，一般为15-25天。培养结果：培养结束后，观察培养基的外观，可以看到杏鲍菇在培养基上形成的白色菌丝和菌盖。当菌盖完全展开，呈现典型的杏鲍菇形态时，可以进行采收。

Phi-X174噬菌体的培养方法：

培养宿主细菌：Phi-X174噬菌体的宿主是大肠杆菌（Escherichia coli），常用的宿主菌株是E. coli C。在液体培养基中培养宿主菌株，如Luria-Bertani（LB）培养基，以得到活跃的宿主细菌。增殖Phi-X174噬菌体：从商业来源或实验室中获得Phi-X174噬菌体溶液。取一定量的宿主菌培养物，将Phi-X174噬菌体溶液加入到培养物中，通常使用适量的噬菌体以实现***。在适当的温度下（例如37摄氏度）进行培养，通常需要较短的培养时间（约1-2小时）。收集噬菌体：在培养一段时间后，宿主细菌会被Phi-X174噬菌体***并破裂，释放出噬菌体颗粒。使用离心机将细菌残渣和细菌碎片离心沉淀。将上清液中的噬菌体颗粒收集起来，通常通过过滤或离心来除去残留的细菌碎片。噬菌体存储：可以将收集到的噬菌体颗粒进行冻干或冷冻保存，以便后续使用。冻干的噬菌体可在干燥条件下长期保存。 波茨坦短芽孢杆菌NK 的菌体细胞为杆状，有芽孢，在显微镜下观察菌体大小为0.4～0.6μm×1.6～6.0μm。

哈维弧菌的培养基：

培养基准备：准备适合哈维弧菌生长的培养基，常用的培养基包括海水琼脂培养基、TCBS（Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose）培养基等。可根据需要添加适当的补充物，如海藻提取物、葡萄糖等。培养基消毒：将培养基加入适当容器中，并使用自动压力灭菌器或高压蒸汽灭菌器进行消毒，确保培养基无菌。菌种接种：选择一株哈维弧菌的菌株，可以从冻存菌种中解冻或使用新鲜分离的菌株。将菌株转移到无菌条件下，可以是一个无菌工作台或一个灭菌的培养箱中。使用无菌的胶头移液管，取一定数量的菌悬浮液，并将其转移到无菌培养基中。培养条件：设置适当的培养条件，如温度、pH值和盐度。哈维弧菌通常在温度为25-30摄氏度下培养，pH值在7-8之间。由于哈维弧菌是水生细菌，所以在培养基中添加适当的盐度，以模拟海水环境。培养过程：将含有菌株的培养基培养瓶密封，并放置在恒温培养箱或恒温摇床中进行培养。培养时间根据需求而有所不同，一般为12-24小时。培养结果：培养结束后，观察培养基的外观，可以看到哈维弧菌在培养基上形成的光滑、圆形的菌落。通过显微镜观察、生化试验等方法，进行菌株的鉴定和评估。 酒窖片球菌在适宜条件下，分裂以直二个方向形成四联，虽有时也可出现成对排列，单个细胞罕见，不形成链状。湿地类芽孢杆菌

悬浮细胞传代，离心收集细胞后加入新的完全培养基混匀后分装即可贴壁细胞传代需要消化后离心细胞传代。哥伦比亚链霉菌

植物乳杆菌的培养方法：

培养基准备：准备适合植物乳杆菌生长的培养基，常用的培养基包括MRS（de Man, Rogosa and Sharpe）培养基、LBS（Lactobacillus Selective）培养基等。根据需求添加适当的补充物，如葡萄糖、酵母提取物等。培养基消毒：将培养基加入适当容器中，并用自动压力灭菌器或高压蒸汽灭菌器进行消毒，确保培养基无菌。菌种接种：选择一株植物乳杆菌的菌株，可以从冻存菌种中解冻或使用新鲜分离的菌株。将菌株转移到无菌条件下，可以是一个无菌工作台或一个灭菌的培养箱中。用无菌的胶头移液管，取一定数量的菌株悬浮液，并将其转移到无菌培养基中。培养条件：设置适当的培养条件，如温度、pH值和氧气含量。植物乳杆菌通常在温度为30-37摄氏度下培养，pH值在5.5-6.5之间。对于无需氧气的乳酸菌，通常在无氧或微氧条件下培养。培养过程：将含有菌株的培养基培养瓶密封，并放置在恒温培养箱或恒温摇床中进行培养。培养时间根据菌株和实验要求而有所不同，通常为12-48小时。培养结果：培养结束后，观察培养基的外观，如果出现酸化现象，可能会产生酸性沉淀物。通过菌落计数、显微镜观察、生化试验等方法，进行菌株的鉴定和评估。 哥伦比亚链霉菌