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用于外泌体提取的体液收集注意事项：1、抽血技巧。操作要轻柔迅速。试管可翻转8-10次使样本与抗凝剂混匀，避免剧烈摇晃。混匀后，将试管固定垂直放置于离心分离器，在顶部记录抽血的准确时间，因为抽血与离心之间的时间间隔可能是一个影响因素。外泌体在抽血后30分钟内是比较稳定的，若时间过长将导致外泌体数量增加。血小板极易因抽血时的物理因素而并释放出外泌体，其中包括接触、压力、切力。2、抽血时间。除了血液黏度，体内血液的各项指标在1天中变化很大。生理节律会对血小板的产生很大的影响。白细胞的募集和循环系统中促炎细胞和细胞会随时间变化。大量的具有特殊表面分子的微粒也被证明会随时间变化。目前尚无设计较好的实验对证实不同时间血液中外泌体的变化，故应在相同的时间采集样本。目前饮食是否会对EV产生影响尚未可知，但是由于脂蛋白可运载RNA且食物的摄取可以影响循环脂蛋白颗粒的类型、数量和作用，故抽血可在较后一次用餐后一段确定的时间进行。现已证实可以分泌外泌体的细胞有：肥大细胞、淋巴细胞、树突状细胞、一些病症细胞、间充质干细胞等。唐山外泌体提取试剂厂家直销

外泌体的提取、分离方法：尺寸排阻色谱法和超滤法；尺寸排阻色谱法是利用分子筛理论，较初是根据蛋白质分子大小分离蛋白质的色谱技术。该方法的主要优点是不需要很大的离心力，从而保证了外泌体的完整性。Mol等[13]对比超高速离心和尺寸排阻色谱法得到的外泌体蛋白，结果显示，后者得到的外泌体的蛋白丰度高于前者。这些基于过滤或尺寸排阻色谱的新方法为外泌体大规模的生产和临床应用提供了可能。超滤也是根据外泌体的尺寸将其分离出来的一种方法，超滤一般被认为是外泌体分离过程中的一个准备过程，通过超滤除去大分子和小分子的蛋白质。不过连续的超滤可以分离出外泌体，和超高速离心相比，超滤不需要特殊的设备就可以较短时间内分离出外泌体。但是，超滤膜对外泌体的黏附作用会降低外泌体的产量，并且超滤过程中施加的外力可能会使外泌体变形或者破裂。金华外泌体提取试剂价格外泌体携带大量特异性的蛋白质以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物质。

外泌体在肺病进程中的作用：在一些病症微环境中，一些病症细胞来源的外泌体能够诱导CD4+T分化为调节性T细胞，压制机体的抗一些病症免疫反应；肺病细胞分泌的外泌体含有miR-21和miR-29a，可在免疫细胞中结合并启动TLR8，使TLR介导的NF-κB信号通路活化，从而导致一些病症的生长和转移。在肺病的侵袭和转移过程中，细胞间通讯扮演着重要的角色。据有关报道称，NSCLC分泌的外泌体内TGFβ和IL10的高表达与肺病的转移密切相关。此外，启动的T细胞可以通过调控Fas信号通路增加基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达，进而促进肺病的转移。这些机制有望成为肺病治病的潜在靶点。虽然大多数外泌体都是促进一些病症的侵袭与转移，但也有报道称，外泌体miR-302b可以通过压制TGFβRⅡ来压制肺病细胞的转移与增殖。如纯度和回收率低，杂蛋白较多（假阳性），颗粒大小不均一，产生难以去除的聚合物。

外泌体的形成与鉴定：首先，细胞膜内陷形成一个杯状结构，包括细胞表面蛋白和与细胞外环境相关的可溶性蛋白，导致早期胞内体(early-sortingendosome，ESE)的从头形成，或者是杯状结构直接和已经存在的ESEs融合；trans-高尔基体和内质网也能协助形成ESEs。ESE成熟后形成晚期胞内体(late-sortingendosomes，LSEs)，较终形成MVBs(也称为多囊内小体)。MVBs是通过endosome限制膜向内凹(即质膜双凹)形成的，这一过程导致MVBs含有多个ILVs。MVB可以与溶酶体或自噬体融合，较终降解或与质膜融合释放作为外泌体的ILVs。外泌体表面蛋白包括四聚体蛋白、整合蛋白、免疫调节蛋白等。外泌体可以包含不同类型的细胞表面蛋白、细胞内蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代谢物。使用可截留100KD分子量的膜，通过离心截留上清中的外泌体，截留完成后。在体内细胞间物质和信号转导中起到重要作用。

外泌体(Exosome)是由细胞分泌而来的微小囊泡，直径约为30-200nm，密度在1.13-1.21g/ml，具有杯状形态、双层膜结构，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等生物体液中。包括瘤细胞在内几乎所有类型的细胞（免疫细胞、神经细胞、干细胞)，都可以产生并释放exosome。Exosome内含有与细胞来源相关的蛋白质rRNA和microRNA，Exosome可通过细胞膜受体直接受体细胞，也可运输蛋白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA，甚至细胞器进入受体细胞，参与细胞间通讯。Exosome在免疫应答、炎症反应、血管生成、凋亡、凝血和废物处理等生理过程发挥关键作用，不同细胞来源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不尽相同，可作为多种疾病的早期诊断标记物，也能作为靶向药物的载体进行疾病。miRNA是一类22nt左右大小的非编码分子，它可以通过外泌体从一个地方转运到另外一个地方行使基因沉默功能。通过检测外泌体中miRNA表达变化，可以发现外泌体中miRNA特异性功能外泌体提取：具有高粘度的生物样品。重庆正规外泌体提取试剂推荐厂家

外泌体提纯试剂盒的特色与优势：样本输入量多样。唐山外泌体提取试剂厂家直销

外泌体的提取方法：1、色谱法。色谱法是利用根据凝胶孔隙的孔径大小与样品分子尺寸的相对关系而对溶质进行分离的分析的方法。样品中大分子不能进入凝胶孔，只能沿多孔凝胶粒子之间的空隙通过色谱柱，首先被流动相洗脱出来；小分子可进入凝胶中绝大部分孔洞，在柱中受到更强地滞留，更慢地被洗脱出。分离到的外泌体在电镜下大小均一，但是需要特殊的设备，应用不普遍。2、超滤离心。由于外泌体是一个大小约几十纳米的囊状小体，大于一般蛋白质，利用不同截留相对分子质量(MWCO)的超滤膜对样品进行选择性分离，便可获得外泌体。超滤离心法简单高效，且不影响外泌体的生物活性，是提取细胞外泌体的一种新方法唐山外泌体提取试剂厂家直销

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