改良克氏双糖铁培养基

动物细胞培养必需的溶液，平衡盐水（BSS）：Hanks 液和Earle液是常用的BSS基础溶液。PH调整液：3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液（二羟乙基哌嗪乙烷磺酸）细胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、胶原酶溶液。1)青、链霉素，每毫升培养液含100U青霉素和100ug链霉素。2)卡那霉素：终浓度为50ug/ml培养液。3）制霉菌素：浓度25U/ml，小瓶分装，每瓶一次用完。常用的动物血清主要有牛血清和马血清。牛血清分为胎牛血清和犊牛血清，前者来源少，价格高；后者要求刚产下尚未哺乳的小牛，因为哺乳后的小牛血清中可能含有更复杂的成分。血清中已知的成分主要有蛋白质、氨基酸、葡萄糖等。蛋白质主要是白蛋白和球蛋白。有些培养基需要添加血清或其它富含蛋白质的物质以促进生长。改良克氏双糖铁培养基

什么培养基中可以省去加酚红？酚红在培养基中用作pH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。酚红本身对生物制品质量并不会产生影响，可以通过纯化技术去除，但酚红在无血清培养基可能带来胞内钠/钾失衡，影响细胞生长，当然这种作用能被血清所中和或减轻。酚红并不是培养基中必需的一种成分，很多国外的疫苗或抗体生产企业在生产过程中都使用无酚红培养基。研究表明，酚红可以模拟固醇类的作用。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。改良Camp-BAP琼脂基础添加剂B常用的培养基中添加的基本营养物质包括碳源、氮源、磷酸盐、有机物、无机盐和微量元素。

HBS 和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在 Eagle′s（2.2g/L） 中比在 Hanks′（0.35g/L）中高。碳酸氢钠需用高水平的 CO2 平衡，以维持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hanks′液在 CO2 培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagle′s液，如果只是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks′液就可以了。由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些。在配制培养用液时，需要注意一点：新配的培养基在经过 0.10um 或 0.22um 滤膜过滤时，溶液的pH 还会向上浮动0.2左右。

不同类型微生物生长对氧化还原电位（F）的要求不一样，一般好氧性微生物在F值为+0.1V以上时可正常生长，一般以+0.3—+0.4V为宜，厌氧性微生物只能在F值低于+0.1V条件下生长，兼性厌氧微生物在F值为+0.1V以上时进行好氧呼吸，在+0.1V以下时进行发酵。F值与氧分压和pH有关，也受某些微生物代谢产物的影响。在pH相对稳定的条件下，可通过增加通气量（如振荡培养、搅拌）提高培养基的氧分压，或加入氧化剂，从而增加F值；在培养基中加入抗坏血酸、硫化氢、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫苏糖醇等还原性物质可降低F值。自制培养基需要小心配比，防止成分误差或者污染。

培养细胞时应使用5%还是10%CO2，或者根本没有影响？一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中 NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5g时，则应使用5%CO2培养细胞。NaHCO3的作用：培养基中使用了 NaHCO3-CO2 缓冲系统，并采用开放培养，使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶，再通过稳定调节温箱中CO2浓度（5%） ，与培养基中的NaHCO3处于平衡状态，从而调节培养基的PH值。NEAA：非必须氨基酸，NEAA（非必需氨基酸） 是含几种非必需氨基酸的合剂，添加到的原培养基不同，NEAA 也有不同的种类，比如添加至MEM的NEAA，含L-Alanine、L-Asparagine、L-Aspartic Acid、 L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine。培养基是一种含有必需营养物质的生长介质，用于细胞、细菌的培养和繁殖。假单胞菌琼脂培养基基础/CN琼脂基础

血肉汤是含有动物红细胞和肉浸出物的液体培养基，适用于需要求血因子的微生物。改良克氏双糖铁培养基

培养基按成分分类有哪些？按形态分类：培养基按其不同的物理状态，可分为液体、流体、半固体和固体4类，培养基的物理状态取决于培养基中是否加人凝固剂或凝固剂的加入量。1、液体培养基(liquidnutrientmedium)不加任何凝固剂，常温下以完全液态存在的培养基，如肉汤培养基或一般液体增菌培养基。2、流体培养基(semi-liquidmedium)在液体培养基中加入0.05%~0.1%的琼脂粉，使其具一定黏度，即成流体培养基。加入琼脂粉增加了培养基的黏度，降低空气中的氧气进人培养基的速度，能使培养基保持较长时间的厌氧条件，有利于一般厌氧菌的生长繁殖，如硫乙醇酸盐培养基、改良马丁培养基等。一般用于霉菌和厌氧菌检查的液体培养基中可加人少量琼脂使其成为流体培养。改良克氏双糖铁培养基

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