培养基按成分分类有哪些?按形态分类:培养基按其不同的物理状态,可分为液体、流体、半固体和固体4类,培养基的物理状态取决于培养基中是否加人凝固剂或凝固剂的加入量。1、液体培养基(liquidnutrientmedium)不加任何凝固剂,常温下以完全液态存在的培养基,如肉汤培养基或一般液体增菌培养基。2、流体培养基(semi-liquidmedium)在液体培养基中加入0.05%~0.1%的琼脂粉,使其具一定黏度,即成流体培养基。加入琼脂粉增加了培养基的黏度,降低空气中的氧气进人培养基的速度,能使培养基保持较长时间的厌氧条件,有利于一般厌氧菌的生长繁殖,如硫乙醇酸盐培养基、改良马丁培养基等。一般用于霉菌和厌氧菌检查的液体培养基中可加人少量琼脂使其成为流体培养。培养基是用于微生物、细胞、组织等体外培养的营养精制的物质。CAT添加剂
长时间高温还会引起磷酸盐、碳酸盐与某些阳离子(特别是钙、镁、铁离子)结合形成难溶性复合物而产生沉淀,因此,在配制用于观察和定量测定微生物生长状况的合成培养基时,常需在培养基中加入少量螯合剂,避免培养基中产生沉淀,常用的螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)。还可以将含钙、镁、铁等离子的成分与磷酸盐、碳酸盐分别进行灭菌,然后再混合,避免形成沉淀;高压蒸汽灭菌后,培养基pH会发生改变(一般使pH降低),可根据所培养微生物的要求,在培养基灭菌前后加以调整。LESEndo 琼脂无血清培养基是在常规培养基中添加多种蛋白质、生长因子等等营养物质来代替动物血清。
细胞培养过程中,细胞培养基是不可或缺的,细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质,也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。通常细胞体外培养时需要加入血清,以维持细胞的生长和存活。而除了血清之外,部分细胞在培养过程中需要添加胰岛素和β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol)等成分来维持细胞状态。MCF-7和NIH:OVCAR-3等细胞需要额外添加胰岛素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等细胞则需要添加β-巯基乙醇,不同细胞加入量会有差异,需根据细胞类型判断。
鉴别培养基(differential media) 在培养基中加入某一反应底物和指示剂,以区别某些微生物的特性从而鉴别之。又分一般鉴别培养基和选择性鉴别培养基。只用于区别不同微生物种类的培养基称为-般鉴别培养基,此类培养基中一般不加抑菌剂而只含指示剂,如克氏双糖铁培养基,含有葡萄糖及乳糖,以酚红作为指示剂,观察培养基底层与斜面的颜色变化判定细菌对葡萄糖和乳糖的发酵能力,加人柠檬酸铁铵,培养后观察是否产生黑色沉着以判定细菌是否分解蛋白胨中的含硫氨基酸而产生硫化氢;又如伊红-美蓝琼脂,含有乳糖(反应底物)、伊红-美蓝(指示剂)用以鉴别大肠埃希菌、肠道病原菌和其他杂菌。一般鉴别培养基的特点是在配方中都含有指示剂,并可用于区别不同种类的微生物,有些鉴别培养基也可同时作为细菌的特殊需要用来分离培养某些细菌,如胰酪胨大豆琼脂和巧克力色血琼脂。通过对培养基的深入研究和优化,可以更好地实现生物医学、生物工程和环境科学等领域的应用和发展。
细菌培养基之牛肉膏琼脂培养基:牛肉膏0.3g ,蛋白胨1.0g,氯化钠0.5g,琼脂1.5g,水100ml在烧杯内加水100ml,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2-7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌:1.05千克每平方厘米、121摄氏度维持15-30分钟。牛心培养基:取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。为了避免细胞爆破释放DNA和蛋白质,培养基中常常添加DNA酶和蛋白酶等酶类。支原体半流体培养基
孟德尔-韦伯利法可以计算培养基的可利用能量。CAT添加剂
培养基的pH必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的较适pH条件各不相同,一般来讲,细菌与放线菌适于在pH7-7.5范围内生长,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范围内生长。值得注意的是,在微生物生长繁殖和代谢过程中,由于营养物质被分解利用和代谢产物的形成与积累,会导致培养基pH发生变化,若不对培养基pH条件进行控制,往往导致微生物生长速度下降或(和)代谢产物产量下降。因此,为了维持培养基pH的相对恒定,通常在培养基中加入pH缓冲剂,常用的缓冲剂是一氢和二氢磷酸盐(如KH2PO4和K2HPO4)组成的混合物。K2HPO4溶液呈碱性,KH2PO4溶液呈酸性,两种物质的等量混合溶液的pH为6.8。当培养基中酸性物质积累导致H+浓度增加时,H+与弱碱性盐结合形成弱酸性化合物,培养基pH不会过度降低;如果培养基中OH-浓度增加,OH-则与弱酸性盐结合形成弱碱性化合物,培养基pH也不会过度升高。CAT添加剂
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