GUS染色步骤:1.将准备好的材料浸泡在GUS染色液中,于25-37℃保温1小时至过夜。2.叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2-3次,至阴性对照材料呈白色。3.肉眼或显微镜下观察,白色背景上的蓝色小点即为GUS表达位点。注:用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和部位的不同而异。例如,拟南芥的根、花和叶片以及幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片(1-3mm)。当操作大的组织和样品时,可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞。无水酒精渗透较慢,而且容易产生极化。江苏品质好的糖原染色试剂盒生产厂家
糖原染色在使用过程中需要注意以下几个方面:尽可能选取小块新鲜组织及时固定。糖原易溶于水,在酶的作用下很容易分解葡萄糖,更易溶于水,固定之前决不能用水或生理盐水等浸洗。应避免用水溶性固定液,宜采用酒精性固定液,如Carnoy液,能较好地保存糖原,但有使糖原流动到细胞一侧的现象,多数人认为是由于固定剂把细胞内的糖原推向固定剂对组织浸透的方向而造成。其他组织应用中性福尔马林固定为佳。组织在4℃左右温度内固定与保存,是针对糖的性质和避免糖原溶于水而采取的相应措施。乙醇能沉淀白蛋白、球蛋白,亦能**白和糖原沉淀,但仍可溶于水,因此较好不单独使用乙醇固定,以乙醇为溶剂的混合固定液固定为佳福建糖原染色试剂盒推荐厂家保存冰箱备用。溶液如显浅红色或草黄色,染色效果较差。
PAS染色试剂配制及染色方法:1.材料与方1.1实验材料新鲜小白鼠肝脏、肾脏标本各30例,均来自我室实验材料。1.2主要试剂1.2.1AAF固定液又称酒精醋酸福尔马林混合固定液,其配方:无水乙醇80mL,冰醋酸5mL、甲醛10mL。1.2.2Carnoy固定液氯仿300mL,冰醋酸100mL,95%酒精600mL。1.2.3过碘酸溶液0.5g过碘酸(HIO)溶于100mL蒸馏水或者70%酒精溶液中,或者按如下配方配制:过碘酸0.8g,95%乙醇70mL,醋酸钠0.27g,水20mL。待溶解后置于4℃冰箱避光保存。1.2.4无色品红液(Schiff氏液)在三角烧内加入蒸馏水500mL,煮沸后,在保持微沸的情况下,加入碱性品红2.5g,并不断摇动约5min(勿使之沸腾),使碱性品红彻底溶解(溶解液为深红色)。冷却到50℃时,过滤,加入1N盐酸50mL,再待冷却至25℃时加入偏重亚硫酸钠2.5g,塞住瓶口,摇动容器以充分混合(此时颜色明显变淡),然后避光放置或冰箱内24h
糖原及粘液染色法:操作方法:(1)石蜡切片脱蜡至水。(2)0.5%过碘酸水溶液5分钟。或1%过碘酸95%酒精溶液(过碘酸再结晶应重新配制使用)。(3)蒸馏水洗,70%酒精洗。(4)Schiff氏液15-30分钟。(Schiff氏液从冰箱取出升至室温使用)(5)流水冲洗10分钟。(6)苏木素浸染细胞核2-3分钟。(7)脱水、透明、封盖。结果:糖原呈红色,细胞核呈蓝色。试剂配制:(1)0.5%过碘酸(HIO4)水溶液或70%酒精溶液。(2)Schiff氏试剂。碱性品红1g蒸馏水200ml1N盐酸(98.3ml比重1.16盐酸,加入蒸馏水成1000ml)20ml偏重亚硫酸钠或钾1g碱性品红1g加入200ml蒸馏水,搅拌加热沸腾,待冷却至50℃过滤,加入当量盐酸至25℃时加入偏重亚硫酸钠。置于暗处,两天后溶液变桔黄色或草黄色,然后加入少量活性碳并震荡、过滤,此时溶液应为无色。保存冰箱备用。溶液如显浅红色或草黄色,染色效果较差。多糖主要指糖原,它是一种胶样液态存在于肝细胞、骨骼肌、心肌等处。
试剂盒:JC-1是一种阳离子脂质荧光染料,可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-10染料是JC-1染料的升级,有着更很好的水溶性以及染料稳定性。原理:JC-1染料在正常细胞内聚集在线粒体内,形成多聚体,发红色荧光;而在凋亡细胞内,由于线粒体膜电位的破坏,不能聚集到线粒体内,以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光。JC-1有单体和多聚体两种存在状态,在低浓度时以单体的形式存在,高浓度时以多聚体形式存在,两者的发射光谱不同,但均可在流式细胞仪绿色(FL-1)通道检测出绿色荧光,JC-1可透过正常细胞膜以单体状态聚集胞内。对某种盐基性人工合成染料如硫堇或甲苯胺蓝有异染性。浙江如何使用糖原染色试剂盒销售厂家
糖原在肝脏及心肌疾患及某些的病变中分布和量都有一定改变。江苏品质好的糖原染色试剂盒生产厂家
糖类染色:糖类从组织化学技术角度来分,可分为多糖、中性粘液物质、酸性粘液物质、粘蛋白及粘脂质。多糖主要指糖原,它是一种胶样液态存在于肝细胞、骨骼肌、心肌等处。因糖原在肝脏及心肌疾患及某些的病变中分布和量都有一定改变,故糖原的染色在临床病理诊断上具有重要意义。(1)肝及心肌糖原沉着症的诊断:糖原染色显示在肝或心肌细胞内有大量糖原存在即可确诊。(2)糖尿病性肾小球硬化症或血管病的诊断。(3)高雪氏病与尼曼——匹克氏病的鉴别:前者为阳性、后者为阴性,做此染色较易鉴别。(4)骨内骨外尤文氏肉瘤的诊断:此瘤80%细胞内有较多糖原,糖原染色为阳性,所以糖原染色为阳性(大多数细胞)可以协助诊断。(5)腺泡状软组织肉瘤与化感瘤:前者棒状小体糖原染色为阳性。江苏品质好的糖原染色试剂盒生产厂家
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染色的原理和临床意义:在同一张涂片上进行两种酯酶染色的方法称为酯酶双染色。多数采用一种特异性酯酶加一种非特异性酯酶染色,常用的有α-醋酸萘酚酯酶与氯乙酸AS-D萘酚酯酶双染色、α-丁酸萘酚酯酶与氯乙酸AS-D萘酚酯酶双染色等。反应的原理基本上同各自的染色原理,同一张涂片上的细胞要分别在两种不同的基质液中作用一定时间,较后复染、显微镜观察。酯酶双染色可同时观察两种不同的白血病细胞,因此在鉴别白血病类型方面明显优于单项染色。急性粒-单核细胞白血病该染色法在急性粒-单核细胞白血病的同一张涂片上可分别出现α-NBE染色和NAS-DCE染色阳性反应的细胞,甚至少数病例在单个细胞内同时出现以上两种酯酶染色...