糖原染色法:染色原理细胞胞浆中存在糖原或多糖类物质(如糖蛋白、粘多糖、糖脂、粘蛋白等),过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化为二醛基,其与Schiff试剂中的无色品红结合后呈现紫红色,沉积在细胞内多糖所在之处。染色步骤:1.组织石蜡包埋切片后脱蜡至水,蒸馏水洗2min(细胞爬片4%多聚甲醛固定后水洗);2.滴加过碘酸溶液,氧化5min;3.蒸馏水洗10min;4.滴加Schiff试剂,侵染10-20min;5.倾去Schiff试剂,流水冲洗10min;6.滴加苏木素染色液,染核1-2min;7.流水冲洗5min;8.酸性乙醇分化液分化。故PAS染色有助于三种急性白血病类型的鉴别。上海咨询糖原染色试剂盒厂家供应
注意事项:染色时:①染色时必须严格按照染色操作说明书进行染色。②在染色过程中,前一个染液浸染完成后,在进行下一个染液的步骤之前,必须彻底充分水洗,使前一个染液冲洗干净后再进行下一步骤。③每次滴加染液前,务必吸干组织上多余的水分,避免多余的水把染液稀释了,造成染色不佳。④在滴加染液时,务必使染液完全覆盖组织,但不能溢出圈外,避免浪费试剂。在染色时,用有色铅笔在组织周围划一个圈,这样在滴加染液时就不会使染液溢出哪家提供糖原染色试剂盒生产厂家切取的材料应小而薄,便于固定液迅速渗入内部。
糖原D-PAS染色液:使用方法:1、两张相同切片,二甲苯脱蜡,梯度乙醇入水。2、一张切片入37℃淀粉酶溶液处理1h。另一张不用淀粉酶溶液处理,入水中1h作为对照。3、流水冲洗两张切片各5~10min。4、入过碘酸溶液,室温放置5~8min,一般不宜超过10min。5、自来水冲洗1次,再用蒸馏水浸洗2次。6、入SchiffReagent,置于室温阴暗处浸染10~20min。7、自来水冲洗10min。8、入Mayer苏木素染色液,染细胞核1~2min。9、(可选)酸性乙醇分化液分化2~5s。10、自来水冲洗10~15min,更换蒸馏水清洗使其返蓝。11、二甲苯透明,中性树胶封固。
糖原染色用于鉴别淋巴系统细胞增生的性质鉴别红细胞系统增生的性质[英文缩写]PAS[参考值]正常人淋巴细胞PAS反应积分正常人幼红细胞PAS反应积分[临床意义]恶性淋巴瘤、急慢性淋巴细胞白血病时PAS积分升高巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、再障贫血时幼红细胞PAS反应多为阴性红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征时幼红细胞PAS反应积分可40甚至高达100--200以上用于不典型巨核细胞与李-斯细胞的鉴别前者PAS反应为强阳性后者为阴性或弱阳性;用于高雪细胞和尼曼一匹克细胞的鉴别前者PAS反应为强阳性而后者反应为阴性或弱性~急性单核细胞白血病原、幼单核细胞POX染色多呈细小颗粒弱阳性反应。
染色的一般原则:因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用凋亡诱导处理的细胞做单阳对照,进行荧光补偿的调节。标记抗体常用荧光素FITC,EGFP激发光:488nm发射光:525nm;使用面较广,价格便宜。PE激发光488nm发射光575nm,此荧光的激发效率较佳,故此荧光得到的信号较强;检测某些弱表达的抗原,推荐使用此荧光素。价格较FITC昂贵。APC激发光633nm,发射光660nm,在配有双激光的流式细胞仪上,此荧光染料可与7-AAD或PI共同使用来避开自带绿色荧光的样本。流式细胞仪相关试剂盒。推荐用于骨和软骨的染色。福建品牌糖原染色试剂盒量大从优
在染色过程中较好不要在玻片上贴标签纸。上海咨询糖原染色试剂盒厂家供应
糖原染色试剂盒。含乙二醇基的多糖经过碘酸氧化,产生醛基,与雪夫(Schiff)试剂中无色品红结合,形成紫红色沉淀物定位于含糖原的胞浆中。该反应称为碘酸-雪夫(PAS)反应。(1)雪夫液配制:碱性品红1g溶于200ml沸水中,冷却60℃时过滤,加1mmol/L盐酸20ml,再冷却至25℃左右,加偏重亚硫酸钠(Na2S2O5)2g,混合后放棕色瓶中,置暗处24h,无色即可放冰箱中保存,呈微红色,则加活性炭1~2g,吸附过滤使成无色液体,放冰箱中保存。若溶液变红,即不能再用。(2)10g/L过碘酸水溶液:过碘酸(HIO42H2O)1g,加蒸馏水至10ml。溶解后盖紧放冰箱备用,一般可用3个月,变黄则失效。上海咨询糖原染色试剂盒厂家供应
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染色的原理和临床意义:在同一张涂片上进行两种酯酶染色的方法称为酯酶双染色。多数采用一种特异性酯酶加一种非特异性酯酶染色,常用的有α-醋酸萘酚酯酶与氯乙酸AS-D萘酚酯酶双染色、α-丁酸萘酚酯酶与氯乙酸AS-D萘酚酯酶双染色等。反应的原理基本上同各自的染色原理,同一张涂片上的细胞要分别在两种不同的基质液中作用一定时间,较后复染、显微镜观察。酯酶双染色可同时观察两种不同的白血病细胞,因此在鉴别白血病类型方面明显优于单项染色。急性粒-单核细胞白血病该染色法在急性粒-单核细胞白血病的同一张涂片上可分别出现α-NBE染色和NAS-DCE染色阳性反应的细胞,甚至少数病例在单个细胞内同时出现以上两种酯酶染色...