培养基制备的基本方法:1.培养基配方的选定:同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此,除所用的是标准方法,应严格按其规定进行配制外.一般均应尽量收集有关资料.加以比较核对。2、培养基的制备记录,每次制备培养基均应有记录,包括培养推各称,配方及其来源.和各种成份的牌号。较终pH值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等,记录应复制一份。3.培养基成分的称取。培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱.较好一次完成,不要中断。可将配方置于傍侧,每称完一种成分即在配方上做出记号,并将所需称取的药品一次取齐,置于左侧,每种称取完毕后,即移放于右侧。5、培养塞pH的初步调整培养基各成分完全溶解后,应进行pH的初步调正。异养微生物的合成能力较弱,不能以CO2作为碳源或主要碳源,故应在培养基中至少添加一种有机物。江苏培养基消毒 培养基制备器
在制备培养基时,通常要考虑以下因素:(1)pH值多数细胞系在pH=7.4下生长得很好。尽管各细胞株之间细胞生长*pH值变化很小,但一些正常的成纤维细胞系以pH=7.4~7.7,转化细胞以pH=7.0~7.4更合适。据报道,上皮细胞以pH=5.5合适。为确定*佳pH值,做一个简单的生长实验或特殊功能分析酚红常用作指示剂,pH=7.4呈红色,pH=7.0变橙色,pH=6.5变黄色,而pH=7.6呈红色中略带蓝色,pH=7.8呈紫色。由于对颜色的观察有很大的主观性,因而必须用无菌平衡盐溶液和同样浓度的酚红配一套标准样,放在与制备培养基相同的瓶子中。(2)缓冲能力碳算盐缓冲系统由于毒性小、成本低、对培养物有营养作用,因此比其他缓冲系统用得多。在pH值条件下的缓冲能力差。(3)渗透压多数培养细胞对渗透压有很宽的耐受范围,一般常用冰点降低或蒸汽压升高测定。如果自己配培养基,可通过测定渗透压防止称量和稀释等造成的误差。江苏培养基消毒 培养基制备器有的培养基还含有素和色素,用于单种微生物培养和鉴定。
微生物培养基制备:溶解灭菌后,盘子上无不溶性结晶紫、无紫色斑;与未溶解和消毒的盘子相比,盘子上有结晶紫和紫色斑点。因此正确的步骤顺序是在高压灭菌前需要进行培养基煮沸溶解。先煮沸溶解后冷却至二十五度,确定pH值;对需要高压灭菌的介质取平均值,高压灭菌后冷却至二十五度,这两种状况测量培养基pH值,固体培养基至少检测两个点,取它们的平均值。控制培养基在容器中不要超过百分之八十,避免填充过多。注意控制高压灭菌时间过长(115-116度)二十分钟即可,温度不超过121度,而且灭菌后的培养基在高温环境中不要长时间存放。
血清培养基主要问题:血清的成份可能有几百种之多,对其准确的成份、含量及其作用机制不清楚,尤其是对其中一些多肽类生长因子、和脂类等尚未充分认识,这给研究工作带来许多困难。血清都是批量生产,各批量之间差异很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保证每批血清的相似性极为困难,从而使实验的标准化和连续性受到限制。对大多数细胞,在体内状态,血清不是它们接触的生理学液体,只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清,因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态,血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长(表皮细胞)。培养基制备器可以将配置、灭菌合二为一,较后恒温保持等待分装。极大地提高了效率。
MS培养基的特点:MS培养基普遍被使用,它的无机盐浓度较高,十分有利于组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长。因为配方中的离子浓度高,在配制、贮存、消毒等过程中,即使有些成分略有出入,也不会对离子间的平衡造成比较大的影响。MS固体培养基可以用来对愈伤组织可以进行诱导,或者用来培养胚、茎段、茎尖及花药。在进行细胞悬浮培养时,它的液体培养基能够得到非常明显的效果。在这种培养基中,有比较适当比例和数量的无机养分,能够满足植物细胞在营养上和生理上的需要。所以,通常情形下,氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分不需要再被添加。MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量相比于其它培养基的基本成分要更加的高,这亦是其的明显特征。培养基制备器血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。江苏培养基消毒 培养基制备器
培养基制备器解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。江苏培养基消毒 培养基制备器
孢子培养基:孢子培养基是供菌种繁殖孢子的一种常用固体培养基,对这种培养基的要求是能使菌体迅速生长,产生较多较好的孢子,并要求这种培养基不易引起菌种发生变异。所以对孢子培养基的基本配制要求是:靠前,营养不要太丰富(特别是有机氮源),否则不易产孢子。如灰色链霉在葡萄糖-硝酸盐-其它盐类的培养基上都能很好地生长和产孢子,但若加入0.5%酵母膏或酪蛋白后,就只长菌丝而不长孢子。第二,所用无机盐的浓度要适量,不然也会影响孢子量和孢子颜色。第三,要注意孢子培养基的pH和湿度。生产上常用的孢子培养基有:麸皮培养基、小米培养基、大米培养基、玉米碎屑培养基和用葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏和食盐等配制成的琼脂斜面培养基。大米和小米常用作霉菌孢子培养基,因为它们含氮量少,疏松、表面积大,所以是较好孢子培养基。大米培养基的水分需控制在21%-50%,而曲房空气湿度需控制在90%-靠前。江苏培养基消毒 培养基制备器
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